詳細(xì)介紹
企業(yè)單位:上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒供應(yīng)商 產(chǎn)品單價(jià):請(qǐng)來電詢價(jià)()
人血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物 Human hemoglobin-advanced glycosylation end products,Hb-AGE ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份 保存條件:2-8℃
產(chǎn)地:美國
實(shí)驗(yàn)方法:
酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
檢測(cè)原理:
采用雙抗體夾心ABC-ELISA原理
操作步驟
方法一 用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,,4℃過夜。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘,。(簡(jiǎn)稱洗滌,,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,,置37℃孵育1小時(shí),。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,,陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔),。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),,洗滌,。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘,。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強(qiáng),,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”,、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O?D值:在ELISA檢測(cè)儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,,即為陽性。
方法二 用于檢測(cè)未知抗體的間接法:
1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,,每孔加0.1ml,4℃過夜,。
2,、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌,。同時(shí)做空白,、陰性及陽性孔對(duì)照于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,,37℃孵育30-60分鐘,,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5,、6。
3. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘,。
4. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)O?D值:在ELISA檢測(cè)儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性,。