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【產(chǎn)品中文名稱】:人羥脯氨酸(Hyp)
【產(chǎn)品英文名稱】:Human 20-hydroxyeicosatetraenoic acid,12-HETE ELISA KIT
【產(chǎn) 品 包 裝】:96T/48T 中英文雙版說明書 提供代測 科研試劑
【經(jīng)營品牌】:RD ,、 RB 、IBL
【保存條件】:2-8℃
【供應商】:上海恒遠生物(國內供應商)
【檢測標本標本】:血清或血漿/本產(chǎn)品僅供科研使用
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱,。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術,。此項技術自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,,目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領域,。
注意事項
1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,,待檢樣品應作一式二份,,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,,說明有非特異性反應,,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。
2. 在ELISA中,,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應,,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
?。?/span>2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4
18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進行包被后,,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉,、安全,、有明顯地顯色反應,而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,,應注意防護。有條件者應使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,,應加入強酸或強堿以終止反應,。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入,。
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