8 ng/L

5號標(biāo)準品

150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

4 ng/L

4號標(biāo)準品

150μl的5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

2 ng/L

3號標(biāo)準品

150μl的4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

1 ng/L

2號標(biāo)準品

150μl的3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

0.5 ng/L

1號標(biāo)準品

150μl的2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準孔,、

待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后

再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸

及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  

4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)

5次,，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3,。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后

15分鐘以內(nèi)進行,。