【樣本要求】

1.樣本類型和采集

血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置0.5-2小時或4℃過夜,，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜趦H供科研使用,，不得用于臨床診斷。-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果）,，稱重后將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。細(xì)胞裂解液: 吸棄培養(yǎng)液,，用 PBS（0.01 M,，pH 7.4）將細(xì)胞洗一遍。用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞（不能用胰酶和 EDTA 處理）,，加入 2-5mL PBS（0.01 M,，pH 7.4）。懸浮細(xì)胞可省略,。收集細(xì)胞懸液,，4℃1000×g 離心 10min，棄去培養(yǎng)基,，用預(yù)冷的 PBS 潤洗 3 次,。加入適量的預(yù)冷 PBS 或非變性細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞,通常 6 孔板一個孔的細(xì)胞量需要 150-250μL PBS 重懸。 將樣品放入-20℃或-80℃,，使樣品冷凍,，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融 3 次,，使細(xì)胞充分裂解,也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,，以達(dá)到裂解的目的。4℃ 10000×g 離心 10min,，除去細(xì)胞碎片,，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。.樣本保存和穩(wěn)定性樣本在 2-8℃條件下,，可以儲存 72h,，在- 20℃或-80℃可以儲存6 個月及以上。樣本收集后,，不是一次檢測完,，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融