LDL,兔低密度脂蛋白ELISA試劑盒技術(shù)指導(dǎo)用于體外定量檢測(cè)血清,、血漿,、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中兔低密度脂蛋白（LDL）的含量,。

                    LDL,兔低密度脂蛋白ELISA試劑盒技術(shù)指導(dǎo)

l 本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清,、血漿、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中兔低密度脂蛋白（LDL）的含量,。

l 有效期：6個(gè)月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

 

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被兔低密度脂蛋白（LDL）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的兔低密度脂蛋白（LDL）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，計(jì)算樣品濃度。

操作說(shuō)明

1．試劑盒保存：-20℃(較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí))；2-8℃(頻繁使用時(shí)),。

2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。

3．中,、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不*之處,，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

4．剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響,。

試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標(biāo)試劑	6ml×1瓶	8	標(biāo)準(zhǔn)品（240 ng/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標(biāo)包被板	12孔×8條	9	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說(shuō)明書(shū)	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個(gè)

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

120 ng/L	5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60 ng/L	4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30 ng/L	3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15 ng/L	2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.5 ng/L	1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   

配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

溫育：操作同3,。

洗滌：操作同5,。

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

標(biāo)本處理

1,、 只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),，請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,，預(yù)留充足的樣本。

2,、 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量,，如果標(biāo)本濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋?zhuān)瓜♂尯蟮臉?biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍,，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

3、 若所檢樣本不包含在說(shuō)明書(shū)所列樣本之中,，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,，并注意留存樣本。

4,、 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致  ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差,。

5、 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,，因該類(lèi)樣本干擾因素 較多,，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時(shí)間等,，所以可能存在檢測(cè)不出的情況。

6,、 某些天然蛋白或重組蛋白,，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,，而不被檢測(cè)出,。

7、 建議使用新鮮樣本，保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏 差,。