詳細(xì)介紹
中文名稱:PG,兔蛋白多糖ELISA試劑盒哪家好
組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用,。標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。
規(guī)格:96T/48T
性狀:液體
保存:2-8℃
有效期:6個月
實驗原理
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品,、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,計算樣品濃度,。
操作說明
1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時),;2-8℃(頻繁使用時),。
2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
3.中,、英文說明書可能會有不*之處,,請以英文說明書為準(zhǔn),。
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,,不會對實驗結(jié)果造成任何影響,。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品(240 ng/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。
120 ng/L | 5號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
60 ng/L | 4號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
30 ng/L | 3號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
15 ng/L | 2號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
7.5 ng/L | 1號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,,拍干,。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外,。
溫育:操作同3,。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
標(biāo)本處理
1,、 只對試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,,預(yù)留充足的樣本。
2,、 實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋,,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
3,、 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,,建議進(jìn)行預(yù)實驗驗證其有效性,并注意留存樣本,。
4,、 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致 ELISA實驗結(jié)果偏差。
5,、 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,,因該類樣本干擾因素 較多,如:細(xì)胞狀態(tài),、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況,。
6,、 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,,而不被檢測出。
7,、 建議使用新鮮樣本,,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏 差。