詳細(xì)介紹
一,、“胎牛血清熱滅活,胎牛血清價錢”概述:
采用健康母牛懷孕的八月齡胎牛血液為原料,,經(jīng)無菌采集、分離,、微孔過濾后而成。本產(chǎn)品無支原體,、無牛病毒,、無噬毒體、內(nèi)毒素含量低于1EU/ml,,適用于細(xì)胞,、組織器官培養(yǎng)、細(xì)胞株保藏,、單抗研制,,是醫(yī)院,、科研院校、動物疫苗,、生物制藥廠家重要培養(yǎng)基之一,。
二、“胎牛血清熱滅活,胎牛血清價錢”使用前處理及儲存條件:
使用前處理:大部分血清在使用前必須滅活處理,,即56℃30分鐘,。滅活的目的是去除血清中的補(bǔ)體成分,避免補(bǔ)體對細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用,。血清經(jīng)過滅活也會損失一些對細(xì)胞有利的成分,,如生長因子,因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng),,這樣做的前提是確認(rèn)血清中不含補(bǔ)體成分,。對于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。
儲存條件:血清一般儲存于-20℃,,同時應(yīng)避免反復(fù)凍融,。購買大包裝的血清后,首先要滅活處理,,然后分裝成小包裝,,儲存于-20℃,使用前融化,。融化時現(xiàn)置于4℃,。融化后的血清在4℃不宜長時間存放,應(yīng)盡快使用,。
三,、操作問題:
如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
1、解凍血清時,,請按照所建議的逐步解凍法(-2O,。C至4。C至室溫),,若血清解凍時改變的溫度太大(如-20,。C至37。C),,實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。
2、解凍血清時,,請隨時將之搖晃均勻,,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生
3、請勿將血清置于37,。C太久,。若在37。C放置太久,,血清會變得混濁,,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量,。
4,、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,,可以無須做此步驟,。
5、若必須做血清的熱滅活,,請遵守56,。C,30分鐘的原則,,并且隨時搖晃均勻,。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,,都會造成沉淀物的增多,。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,,因為它可能會阻塞過濾膜。
四,、“”常見問題處理:
1.血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃,。然而,若存放于4℃時,,請勿超過一個月,。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),,再放回冷凍,。
2.解凍血清先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
3.血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,,亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量,。若您欲去除這些絮狀沉淀物,,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4.加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,、平滑肌細(xì)胞時,,推薦使用熱滅活血清。
5.做熱滅活有必要嗎?實驗顯示,,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),,或*沒有任何作用,,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,,像是“小黑點”,,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,,又會使此沉淀物更增多,,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須,,可以不需要做熱處理這一步,。不但節(jié)省時間,更確保血清的質(zhì)量!
6.細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理,?一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點,,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,,然后,,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài),黑點是否游動,。如果細(xì)胞被污染,,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃,、變混濁,。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等,。如果在鏡下觀察細(xì)胞,,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,,沒有任何變化,,那么,黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):
(1)細(xì)胞生長過老,,破碎的細(xì)胞殘骸
(2)血清質(zhì)量不好,,反復(fù)凍融的結(jié)果
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì),、容器不合格,。可應(yīng)用離心,、過濾的方法去除這些黑點
(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點,,可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除