一,、“胎牛血清透析”概述：

   采用健康母牛懷孕的八月齡胎牛血液為原料,，經(jīng)無菌采集、分離,、微孔過濾后而成,。本產(chǎn)品無支原體、無牛病毒,、無噬毒體,、內(nèi)毒素含量低于1EU/ml，適用于細(xì)胞,、組織器官培養(yǎng),、細(xì)胞株保藏、單抗研制,，是醫(yī)院,、科研院校、動(dòng)物疫苗,、生物制藥廠家重要培養(yǎng)基之一,。


二、“胎牛血清透析”使用前處理及儲(chǔ)存條件：

使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理,，即56℃30分鐘,。滅活的目的是去除血清中的補(bǔ)體成分，避免補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用,。血清經(jīng)過滅活也會(huì)損失一些對(duì)細(xì)胞有利的成分,，如生長因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng),，這樣做的前提是確認(rèn)血清中不含補(bǔ)體成分,。對(duì)于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。 
儲(chǔ)存條件：血清一般儲(chǔ)存于－20℃,，同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融,。購買大包裝的血清后,，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝,，儲(chǔ)存于－20℃,，使用前融化。融化時(shí)現(xiàn)置于4℃,。融化后的血清在4℃不宜長時(shí)間存放,，應(yīng)盡快使用。

 三,、操作問題：
如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
1,、解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2O,。C至4,。C至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20,。C至37,。C)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。
2,、解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生
3、請(qǐng)勿將血清置于37,。C太久,。若在37。C放置太久,，血清會(huì)變得混濁,，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量,。
4,、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要,，可以無須做此步驟。
5,、若必須做血清的熱滅活,，請(qǐng)遵守56。C,，30分鐘的原則,，并且隨時(shí)搖晃均勻,。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻,，都會(huì)造成沉淀物的增多,。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?　欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。
四,、“”常見問題處理：
1.血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃,。然而，若存放于4℃時(shí),，請(qǐng)勿超過一個(gè)月,。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍,。  
2.解凍血清先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是,，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。        
3.血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中,，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量,。若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜。 
4.加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究,，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清,。 
5.做熱滅活有必要嗎?實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”,，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。若非必須，可以不需要做熱處理這一步,。不但節(jié)省時(shí)間,，更確保血清的質(zhì)量! 
6.細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理,？一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn),，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,，然后,，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng),。如果細(xì)胞被污染,，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃,、變混濁,。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等,。如果在鏡下觀察細(xì)胞,，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,，沒有任何變化,，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)： 
（1）細(xì)胞生長過老,，破碎的細(xì)胞殘骸 
（2）血清質(zhì)量不好,，反復(fù)凍融的結(jié)果 
（3）配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長 
（4）配制培養(yǎng)基的水質(zhì),、容器不合格,。可應(yīng)用離心,、過濾的方法去除這些黑點(diǎn) 
（5）培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除