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淺談ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍
閱讀:1149 發(fā)布時(shí)間:2016-9-5 近二十幾年來(lái),免疫學(xué)分析方法發(fā)展突飛猛進(jìn),,尤其是在使用標(biāo)記了的抗原和抗體的分析技術(shù)以后,,使原來(lái)許多經(jīng)典的分析方法在敏感性和特異性方面都不能相比。繼50年代的免疫熒光(IFA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技術(shù)之后,,在70年代初期又建立了用酶來(lái)標(biāo)記抗原或抗體的分析技術(shù),。由于酶的生物催化作用,一個(gè)酶分子在數(shù)分鐘內(nèi)可以催化幾十幾百個(gè)底物分子發(fā)生反應(yīng),,產(chǎn)生了放大作用,,使得原來(lái)極其微乎其微的抗原或抗體在數(shù)分鐘后就可被識(shí)別出來(lái),這種技術(shù)被稱(chēng)為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(簡(jiǎn)稱(chēng)ELISA法),。
基本原理:
ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合,,此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性,也不影響酶的生物學(xué)活性,。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合,。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型,,出現(xiàn)顏色反應(yīng),。因此,可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng),,顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定,,這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái),,使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。
ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),,現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定,,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異,、簡(jiǎn)單,、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn),。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗體,,而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原,,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,,可概括四個(gè)方面:
1.免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位,。
2.研究抗酶抗體的合成。
3.顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng),。
4.定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份,。
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