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如何避免ELISA實(shí)驗(yàn)的的過失
閱讀：973 發(fā)布時(shí)間：2015-8-31Elisa實(shí)驗(yàn)是一種敏感性高,，特異性強(qiáng),，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法,。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,，操作簡便,，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,。依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。實(shí)驗(yàn)的過程中不可避免會(huì)造成過失，直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,，那怎樣避免ELISA實(shí)驗(yàn)過程中的過失呢,？讓我們一起關(guān)注以下內(nèi)容
*：檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器,、器械,，具有一定總結(jié)和分析問題的能力，對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決,。
第二：操作前仔細(xì)閱讀說明書,，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號(hào)的試劑不可混用,。值得改進(jìn)的地方,，反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)，比如洗板次數(shù)的掌握等。
第三：評(píng)估試劑的實(shí)用性,，試劑的穩(wěn)定與否,，對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,，應(yīng)進(jìn)行陰,、陽對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn)，判定試劑符合要求后方可使用,。
第四：加樣要準(zhǔn)確,、快速。加樣不準(zhǔn)確,，酶物的量不能確定,，直接影響顯色結(jié)果。另外,，顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),，如果加樣遲緩,，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時(shí)間暴露在外,，尤其室溫過高時(shí),，保存期會(huì)縮短甚至失效。
第五：使用校對(duì)過的微量移液器,，排除自然誤差,。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測尤為重要
第六：嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間，顯色時(shí)間過短,，加入終止液反應(yīng)終止后,，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性,。超過顯色要求時(shí)間后顯色,，應(yīng)判為假陽性，這可能與試劑本身有關(guān),。加顯色劑后立即顯色,，不可報(bào)陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果,。
第七：洗滌*,，洗板不*,，酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽性,。另外，洗滌液要新鮮,，現(xiàn)用現(xiàn)配,，陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,，也可能出現(xiàn)假陽性。
第八：嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間,，反應(yīng)時(shí)間過長,，酶失活；反應(yīng)時(shí)間過短,，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,，物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉,，都可能造成假陰性,。
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