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的ELISA實(shí)驗(yàn)如何執(zhí)行操作
閱讀:970 發(fā)布時(shí)間:2014-9-16 在策劃實(shí)驗(yàn)之前首要就要了解到該實(shí)驗(yàn)的復(fù)雜性,雖說(shuō)ELISA操作簡(jiǎn)單,,卻步驟多而復(fù)雜,,的ELISA實(shí)驗(yàn)如何執(zhí)行操作?上海恒遠(yuǎn)教您幾招實(shí)驗(yàn)注意:
看似很無(wú)聊,,其實(shí)很重要的洗滌步驟中,,如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音,。如有必要,,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng),。如果背景過(guò)高,,而您懷疑洗滌不夠時(shí),可以嘗試增加洗滌次數(shù),。
洗板方法有手工與自動(dòng)兩種,,在加樣步驟中注意:吸嘴的潔凈與否和吸量的準(zhǔn)確性,直接影響檢測(cè)結(jié)果,。由于吸嘴構(gòu)造特殊,,導(dǎo)致清洗困難,加大了交叉污染的機(jī)會(huì),。建議用一次性吸嘴,。加樣器也要經(jīng)常清洗,定期校準(zhǔn),。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,。
試劑盒規(guī)格有96T與48T兩種,,上海恒遠(yuǎn)所提供的高質(zhì)量進(jìn)口試劑盒供實(shí)驗(yàn)室研究使用,需要在2-8℃溫度中保存,,有效期為半年,,也就是6個(gè)月。
1. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
2. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
3. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
ELISA包被用抗原或抗體的濃度,,包被的溫度和時(shí)間,包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定,??贵w和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,,在4-8℃冰箱中放置一個(gè)晚上,,37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的zui適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,,每批材料需通過(guò)實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定,。
能夠熟練的掌握好ELISA實(shí)驗(yàn)的每一步注意與技巧之后還怕結(jié)果不佳?配上上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒定能助您實(shí)驗(yàn)成功,!