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實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解sIL-2R檢測(cè)的基本原理

2.掌握sIL-2R檢測(cè)的方法的臨床意義,。

實(shí)驗(yàn)原理

sIL-2R可與細(xì)胞膜表面的受體（IL-2R）競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合IL-2，從而成為一種免疫抑制物質(zhì),。在正常人血清和尿液中可檢出低水平的sIL-2R,，在某些疾病發(fā)生時(shí)如器官移植、排斥反應(yīng),、病毒性感染,、惡性腫瘤、創(chuàng)傷和自身免疫病等,，sIL-2R在血清和其他體液中的水平增高,，且與病情、病程密切相關(guān),。本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心法測(cè)定原發(fā)性肝癌患者血清sIL-2R水平,。（夾心法原理參見實(shí)驗(yàn)五免疫酶技術(shù)）

即： 抗體-——待檢血清——抗體——酶標(biāo)抗抗體——顯色

實(shí)驗(yàn)用品

1.材料、試劑：待測(cè)人血清,、IL-2Rα陽(yáng)性,、陰性參考血清、IL-2Rα單抗、兔抗IL-2Rα多克隆抗體,、酶結(jié)合物（HRP-抗兔IgG）,、顯色A液、B液,、PBS洗滌液、終止液,。

2.器具：吸管,、滴管、試管,、48孔聚苯乙烯反應(yīng)板,、50μl微量移液器、恒溫箱（370C）

實(shí)驗(yàn)方法

預(yù)步驟：先用一定濃度的IL-2Rα單抗包被聚苯乙烯板的小孔,，4℃冰箱過夜,，次日取出甩盡液體備用。

（1）微量移液器分別加待檢血清,、陽(yáng)性對(duì)照,、陰性對(duì)照各50μl于1、2,、3孔中,，370C水浴箱溫育40min。

（2）PBS液洗板3次,，每次3min,，甩干。

（3）每孔加入兔抗IL-2Rα多抗,，370C水浴箱溫育30min,。

（4）用PBS液洗板3次，每次3min,，甩干

（5）每孔加入酶結(jié)合物（HRP-抗兔IgG）2滴,，370C水浴箱溫育30min。

（6）每孔分別加入顯色A液,、B液各1滴,，混勻。370C水浴箱溫育5-10min,。

取出肉眼觀察結(jié)果,。如待檢血清溶液與陽(yáng)性對(duì)照一致均為藍(lán)色，表明待檢血清為sIL-2R陽(yáng)性血清,。