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ABS-ELISA試劑盒常見方法下載
閱讀:1511 發(fā)布時間:2013-4-28ABS-ELISA試劑盒常見方法
ABS為親和素(avidin)生物素(biotin)系統(tǒng)(system)的略語。親和素是一種糖蛋白,,分子量60000,,每個分子由4個能和生物素結(jié)合的亞基組成。生物素為小分子化合物,,分子量244,。用化學(xué)方法制成的衍生物素-羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質(zhì)和糖等多種類型的大小分子形成生物素標記產(chǎn)物,標記方法頗為簡便,。生物素與親和素的結(jié)合具有很強的特異性,,其親和力較抗原抗體反應(yīng)大得多,兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定,。由于一個親和素可與4個生物素分子結(jié)合,,因此如把ABS與ELISA法可分為酶標記親和素-生物素(LAB)法和橋聯(lián)親和素-生物素(ABC)法兩種類型,。兩者均以生物素標記的抗體(或抗原)代替原ELISA系統(tǒng)中的酶標抗體(抗原)。在LAB中,,固相生物素先與不標記的親和素反應(yīng),,然后再加酶標記的生物素以進一步提高敏感度。在早期,,親和素從蛋清中提取,,這種卵親和素為堿性糖蛋白,與聚苯乙烯載體的吸附性很強,,用于ELISA中可使本底增高,。從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素則無此缺點,在ELISA應(yīng)用中有替代前者的趨勢,。由于ABS-ELISA較普通ELISA多用了兩種試劑,,增加了操作步驟,在臨床檢驗中ABS-ELISA應(yīng)用不多,。
ELISA的原理
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,,又保留酶的活性,。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開,。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),,故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,,使測定方法達到很高的敏感度
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