日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

                                               冰凍切片的免疫組化染色操作步驟

1. 新鮮組織立即在恒冷冰凍切片機(jī)內(nèi)切片（ 也可- 80℃保存），厚度為 5～6μm,。

2. 載玻片可不打底，裱片后,，立即用電吹風(fēng)吹干,。

3. 如不馬上染色，可密封后- 20℃保存,。

4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分鐘,。

5. PBS 洗 2 次，每次 5 分鐘,，（ 必要時(shí)應(yīng)用 0.1%檸檬酸鈉+0.1%triton打孔）

6. 3% H2O2滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，20 分鐘，避光;

7. 用 PBS 洗 2 次,，每次 5 分鐘;

8. 正常血清封閉：從染片缸中取出切片,，擦凈切片背面水分及切片正面組織周圍的水分 （保持組織呈濕潤(rùn)狀態(tài),）滴加正常山羊或兔血清 （與第二抗 體 同源動(dòng)物血清）處理，37℃,，15 分鐘,。

附：正常血清配制 （ 或按試劑盒規(guī)定的濃度配制）：按 1:20比例，用 PBS 配制,，每張切片需要量按 50μ+5μl （10%拋灑量） 計(jì)算,。

9.滴加*抗體：用濾紙吸去血清，不洗,，直接滴加*抗體,，37℃ 2 小時(shí)（也可置于 4℃冰箱過(guò)夜） 。

10.PBS：5 分鐘,，2 次（置于搖床） ,。

11.滴加生物素化的二抗，37℃,，40 分鐘,。

12.PBS：5 分鐘，2 次（置于搖床） 。

13.滴加三抗 （SAB 復(fù)合物） ,，37℃,，40 分鐘。

14.PBS：5 分鐘,，2 次（置于搖床） ,。

15.DAB 顯色，鏡下觀察,，適時(shí)終止（自來(lái)水沖終止） ,。

附：DAB 的配制① 儲(chǔ)備液（DAB 25mg/ml）的配制：DAB 250mg + PBS 10ml，待*溶解后分裝成 1ml,，100μl,，50μl ，20μl 等,，-20℃,，凍存。② 工作液：DAB 儲(chǔ)備液 20μl + PBS 1000μl + 3% H2O2 5μl

16.自來(lái)水（細(xì)水）充分沖洗,。

17.蘇木素復(fù)染,，室溫，30 秒,，自來(lái)水沖洗,。

18.自來(lái)水沖洗返藍(lán)，15 分鐘,。

19.梯度酒精脫水：80%,，2 分鐘 95%，2 分鐘 100%,，2 次,，5 分鐘。

20.二甲苯透明：I ,，II （二甲苯）各 5 分鐘

21.封片：加拿大樹膠（或中性樹膠）封片,。