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人脫氧吡啶酚試劑盒使用說(shuō)明書(shū)下載

閱讀:205          發(fā)布時(shí)間:2012-10-15
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                     人脫氧吡啶酚試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑僅供研究使用 標(biāo)本:血清或血漿 
試驗(yàn)原理
        DPD試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知DPD濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。先將DPD和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育,。洗滌后,,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP,。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A,、B,,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中DPD的濃度呈比例關(guān)系,。 
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份
96孔配置
48孔配置
96/48人份酶標(biāo)板
1塊板(96T)
半塊板(48T)
塑料膜板蓋
1塊
半塊
標(biāo)準(zhǔn)品:500ng/ml  
1瓶(1.0ml)
1瓶(0.5ml)
空白對(duì)照
1瓶(1.0ml)
1瓶(0.5ml)
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液
1瓶(8.0ml)
1瓶(4.0ml)
生物素標(biāo)記的抗DPD抗體
1瓶(8.0ml)
1瓶(4.0ml)
親和鏈酶素-HRP
1瓶(12ml)
1瓶(5ml)
洗滌緩沖液
1瓶(20ml)
1瓶(10ml)
底物A
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
底物B
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
終止液
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
 自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul,、10ul,、50ul、100ul,、200ul,、500ul、1000ul,。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等,。 
樣品收集、處理及保存方法 
1,、血清……操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2,、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3,、 細(xì)胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,,取上清液。
 5,、 保存……如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 
人脫氧吡啶酚試劑盒操作注意事項(xiàng) 
●   試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。
●   實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
●   不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
●   使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器,。
●   使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
●   底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
●   加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
●   按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
安全性 
1.   避免直接接觸終止液和底物A、B,,一旦接觸到這些液體,,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2.   實(shí)難中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3.   不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。 
試劑的準(zhǔn)備 
1.   標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,,不能儲(chǔ)存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
500
ng/ml
(6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
250
ng/ml
(5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
125
ng/ml
(4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
62.5
ng/ml
(3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
31.2
ng/ml
(2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15.6
ng/ml
(1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0
ng/ml
(空白對(duì)照)
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
 2.   洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋,。 
試劑盒性能 
1.   靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2.   特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3.   重復(fù)性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。 
人脫氧吡啶酚試劑盒操作步驟 
1.   使用前,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2.   根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
3.   加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育45分鐘,。
4.   甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次,。如果用洗板機(jī)洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次。
5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘。
6.   甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
7.   每孔加入底物A、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育5分鐘。避免光照,。
8.   取出酶標(biāo)板,,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
9.   在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。 
結(jié) 果 判 斷 與 分 析 
1、 儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2,、 以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),,相應(yīng)的DPD標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,,樣品的DPD含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度,。
3,、 檢測(cè)值范圍: 0-500ng/ml
4、 敏感度:1.95ng/ml

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