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免疫組化的方法和優(yōu)點(diǎn)
閱讀：1074 發(fā)布時(shí)間：2012-7-31| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 44.5KB |
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免疫組化的方法和優(yōu)點(diǎn)
一,、免疫組化技術(shù)的基本原理
應(yīng)用免疫學(xué)及組織化學(xué)原理，對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位的定性,、定位或定量研究,，這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。
*,，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性,。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來(lái),，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,，制備特異性抗體，再用這種抗體（*抗體）作為抗原去免疫動(dòng)物制備第二抗體,，并用某種酶（常用辣根過(guò)氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合,，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無(wú)色的,，因此,，還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來(lái)（常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒）。通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),，顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分，在顯微鏡下可清晰看見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,，從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布,、含量。組織或細(xì)胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì),，如蛋白質(zhì),、多肽、氨基酸,、多糖,、磷脂、受體,、酶,、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè),。
二,、免疫組織化學(xué)染色方法
1、按標(biāo)記物質(zhì)的種類,，如熒光染料,、放射性同位素、酶（主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白,、膠體金等,，可分為免疫熒光法、放射免疫法,、酶標(biāo)法和免疫金銀法等,。
2、按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步,、三步或多步法）;與直接法相比,，間接法的靈敏度提高了許多。
3,、按結(jié)合方式可分為抗原—抗體結(jié)合,，如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶（PAP）法和親和連接，如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC）法,、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)（SP）法等,，其中SP法是zui常用的方法。
三,、幾種常用免疫組織化學(xué)方法的原理
1,、免疫熒光方法
是zui早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,，先將已知抗體標(biāo)上熒光素,，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察,。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析,。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng),、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便,，所以在臨床病理診斷,、檢驗(yàn)中應(yīng)用比較廣。
2,、免疫酶標(biāo)方法
免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,，于60年代發(fā)展起來(lái)的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,，然后加入酶的底物，有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,，通過(guò)光鏡或電鏡,，對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究,。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前zui常用的技術(shù)。
本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準(zhǔn)確,，對(duì)比度好,，染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，適合于光,、電鏡研究等,。
免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,，且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新,，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來(lái)越方便,。目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬PAP法,、ABC法、SP法等,。
3,、免疫膠體金技術(shù)
免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠,，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白,，對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒(méi)有明顯的影響。因此,，用膠體金標(biāo)記一抗,、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針，就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性,、定位,，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究,。由于膠體金本身呈淡至深紅色,，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察,。
四,、免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)
1、特異性強(qiáng) 免疫學(xué)的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,，因此,，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分,，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分,。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng),。
2、敏感性高 在應(yīng)用免疫組化的起始階段,，由于技術(shù)上的限制,，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù),，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍,、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍,、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合,，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作,。
3,、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合 該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,，對(duì)病理學(xué)研究的深入是十分有意義的,。
| 人集落刺激因子（CSF）ELISA Kit | Human colony-stimulating factor,CSF ELISA Kit |
| 人激動(dòng)異構(gòu)酶/細(xì)胞分裂素MB（CKMB）ELISA Kit | Human cytokinin MB,CKMB ELISA Kit |
| 人肌細(xì)胞素（MYOG）ELISA Kit | Human myogenin,MYOG ELISA Kit |
| 人γ干擾素誘導(dǎo)單核細(xì)胞因子（MIGF/CXCL9）ELISA Kit | Human monocyte interferon gamma inducing factor,MIGF ELISA Kit |
| 人干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞趨化因子（ITAC/CXCL11）ELISA Kit | Human Interferon inducible T-cell Chemoattractant,I-TAC ELISA Kit |
| 人白細(xì)胞分化抗原14（CDl4）ELISA Kit | Human cluster Of differentiation,CDl4 ELISA Kit |
| 人肥大細(xì)胞類胰蛋白酶（MCT）ELISA Kit | Human mast cell tryptase,MCT ELISA Kit |
| 人凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）ELISA Kit | Human apoptosis inducing factor,AIF ELISA Kit |
| 人凋亡蛋白酶激活因子1（ICAD）ELISA Kit | Human apoptosis protease activating factor-1,ICAD ELISA Kit |
| 人白細(xì)胞共同抗原（LCA/CD45）ELISA Kit | Human leukocyte common antigen,LCA/CD45 ELISA Kit |
| 人白細(xì)胞分化抗原4（CD4）ELISA Kit | Human cluster Of differentiation,CD4 ELISA Kit |
| 小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（RANTES/CCL5）ELISA Kit | Mouse regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted,RANTES ELISA kit |
| 人信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子（Smad1）ELISA Kit | Human signal transduction-Smad1 ELISA Kit |
| 人信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）ELISA Kit | Human signal transduction-Smad7 ELISA Kit |