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牛病毒性腹瀉病毒elisa試劑盒說(shuō)明書
閱讀：722 發(fā)布時(shí)間：2012-6-4| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 137.7KB |
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上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司專業(yè)elisa試劑盒生產(chǎn)商,，elisa試劑盒代理商,，elisa試劑盒批發(fā),，本公司試劑盒種類齊全，包括人,、大鼠,、小鼠、兔,、羊,、馬、牛,、豚鼠,、猴,、魚,、植物、食品等,，近千種試劑盒已經(jīng)投入市場(chǎng),，被廣大科研工作者所使用，備受客戶的青睞如需了解elisa試劑盒價(jià)格及產(chǎn)品更多詳細(xì)說(shuō)明,，
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牛病毒性腹瀉病毒（ BVDV）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說(shuō)明書
本試劑盒僅供研究使用,。
96T
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中病毒性腹瀉病毒（ BVDV）表達(dá),。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中牛病毒性腹瀉病毒（ BVDV）表達(dá),。用純化的牛病毒性腹瀉病毒（ BVDV）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，可與樣品中病毒性腹瀉病毒（ BVDV）相結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP標(biāo)記的病毒性腹瀉病毒（ BVDV）抗體結(jié)合，形成抗體 -抗原 -酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB顯色,。 TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（ OD值）,，與 CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中牛病毒性腹瀉病毒（ BVDV）的存在與否,。
試劑盒組成
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標(biāo)本要求
標(biāo)本收集方法：
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
3. 尿液：
用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右,。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
6. 組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用,。
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
3. 尿液：
用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右,。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
6. 組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用,。
本公司試劑盒種類齊全,，包括人、大鼠,、小鼠,、兔、羊,、馬,、牛、豚鼠,、猴,、魚、植物,、食品等,，近千種試劑盒已經(jīng)投入市場(chǎng)，為廣大科研工作者所使用,，備受客戶的青睞
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于 -20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因 NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（ HRP）活性。
操作步驟
1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2孔,、陽(yáng)性對(duì)照 2孔、空白對(duì)照 1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50µl,。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40µl,，然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘,。
4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3,。
8.洗滌：操作同 5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻,， 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零,， 450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（ OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
操作程序總結(jié)：
計(jì)算和結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值 ≥1.00;陰性對(duì)照平均值 ≤0.10臨界值（ CUT OFF）計(jì)算：臨界值 =陰性對(duì)照孔平均值 +0.15陰性判定：樣品 OD值<臨界值（ CUT OFF）者為牛病毒性腹瀉病毒（ BVDV）陰性陽(yáng)性判定：樣品 OD值≥臨界值（ CUT OFF）者為牛病毒性腹瀉病毒（ BVDV）陽(yáng)性
,。注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
5．底物請(qǐng)避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),，參考波長(zhǎng)為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為 2M的硫酸,，使用時(shí)必須注意安全,。保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期： 6個(gè)月