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山羊痘抗體（Pox-Ab）說明書
閱讀：339 發(fā)布時間：2011-11-8 本試劑盒僅供研究使用
使用目的：
山羊痘抗體試劑盒用于測定山羊血清,、血漿及相關液體樣本中山羊痘抗體（ Pox-Ab）含量,。
實驗原理
山羊痘抗體試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中山羊痘抗體（ Pox-Ab）水平。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原,，往包被單抗的微孔中依次加入山羊痘抗體（ Pox-Ab），再與 HRP標記的抗原結合,，形成抗原 -抗體-酶標抗原復合物,，經過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的山羊痘抗體（ Pox-Ab）呈正相關,。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD值），通過標準曲線計算樣品中山羊山羊痘抗體（ Pox-Ab）濃度,。
山羊痘抗體試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（ 120pg/ml） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔 × 8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑 A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑 B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于 -20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。
山羊痘抗體試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘,。
4. 配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30秒后棄去，如此重復 5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
11. 測定：以空白空調零,， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應在加終止
60pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入 150μl標準品稀釋液
30pg/ml 4號標準品 150μl的 5號標準品加入 150μl標準品稀釋液
15pg/ml 3號標準品 150μl的 4號標準品加入 150μl標準品稀釋液
7.5pg/ml 2號標準品 150μl的 3號標準品加入 150μl標準品稀釋液
3.75pg/ml 1號標準品 150μl的 2號標準品加入 150μl標準品稀釋液
液后 15分鐘以內進行,。
山羊痘抗體試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在 5分鐘內,，如標本數量多，推薦使用排槍加樣,。
4．請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（ n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準 .
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期： 6個月