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高糖對(duì)大鼠腹膜間皮細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響及苦參堿的干預(yù)作用

朱士彥１，甘 平２,，廖 彧１,，巫建芳１，龍貴華１

（１．廣東省佛山市順德區(qū)龍江醫(yī)院腎內(nèi)科 ５２８３１８,；

２．貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科,，貴陽(yáng) ５１００００）

［摘要］ 目的 研究高糖刺激下大鼠腹膜間皮細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子α（ＴＮＦ－α）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β１（ＴＧＦ－β１）及苦參堿的干預(yù)作用，探討腹膜纖維化發(fā)生機(jī)制,。方法 通過(guò)體外培養(yǎng)大鼠腹膜間皮細(xì)胞（ＰＭＣｓ）,，依據(jù)加入藥物濃度分成５組：２．５％葡萄糖組（ｎ＝１５，Ａ 組）,；低糖苦參堿組（２．５％葡萄糖,，ｎ＝１５，Ｂ組）,；４．２５％葡萄糖組（ｎ＝１５,，Ｃ組）；高糖 苦 參 堿 組（４．２５％葡萄 糖,，ｎ＝１５,，Ｄ組）；對(duì)照組（ｎ＝１５,，Ｅ 組,，僅加不含血清的 ＤＭＥＭ－Ｆ１２ＢＭＳＣ 培養(yǎng) 基），分別 于 第 ２４,、４８、７２小時(shí)收集培養(yǎng)上清液,，采用ＥＬＩＳＡ 法測(cè)定各組培養(yǎng)上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 濃度 的 變 化,，同時(shí)觀察各組大鼠腹膜間皮細(xì)胞光鏡下的表現(xiàn),。結(jié) 果 光 鏡下，可見 Ｅ組和 Ｂ組腹膜間皮細(xì)胞小,，呈卵圓形或圓形,，生長(zhǎng)較為密集。Ａ,、Ｃ,、Ｄ組腹膜間皮細(xì)胞大、呈梭形或多邊形,，分布較為稀疏,；在 Ａ 組，培養(yǎng)上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平較 Ｅ組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)變化（Ｐ＞０．０５）,；而在Ｃ組,，培養(yǎng)上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平較 Ｅ組增加明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）,。在 Ｂ組和 Ｄ組中,，ＰＭＣｓ分泌 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平 Ｂ組較 Ａ 組減少，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）,；Ｄ組較 Ｃ組明顯下降,，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論 苦參堿能拮抗高糖致大鼠腹膜間皮細(xì)胞分泌 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１,，從而保護(hù)腹膜間皮細(xì)胞,。

［關(guān)鍵詞］ 葡萄糖；苦參堿,；腫瘤壞死因子α,；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β１；腹膜間皮細(xì)胞腹膜 透 析 （ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｄｉａｌｙｓｉｓ,，ＰＤ）由于自身生物相容 性好,，中分子物質(zhì)清除效率高等優(yōu)點(diǎn)，成為目前終末期腎臟疾病的shou選透析方式,。但是反復(fù)發(fā)作腹膜炎癥可使有效腹膜透析面積減少,，從而導(dǎo)致腹膜對(duì)溶質(zhì)的清除及水分的超濾功能減退甚至功能衰竭，是部分 ＰＤ患者改行血液透析治療的主要原因之一 ［１］,。實(shí)驗(yàn)表明,，腹膜長(zhǎng)期處于高滲微環(huán)境，可終破壞腹膜的整體結(jié)構(gòu)性,，葡萄糖及其與機(jī)體產(chǎn)生的炎變產(chǎn)物是致 ＰＤ相關(guān)性腹膜超濾衰竭重要原因之一［２－３］,。如何從病理生理學(xué)機(jī)制方面深入探究腹膜超濾衰竭的發(fā)病機(jī)理，成為近年來(lái)醫(yī)學(xué)研究的重要課題內(nèi)容,。

現(xiàn)有研 究 證 實(shí) 人 腹 膜 間 皮 細(xì) 胞 （ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,，ＰＭＣｓ）具有多重重要的生理功能,，如分泌、吸收,、修復(fù),、支持等。在腹膜發(fā)生炎變時(shí),，ＰＭＣｓ自身分泌的炎性因子和細(xì)胞因子,，又影響到腹膜 自 身 的 修 復(fù)［４－５］。本研 究 旨 在 探 討 高 糖 致大鼠 ＰＭＣｓ分泌腫 瘤 壞 死 因 子α（ＴＮＦ－α）和轉(zhuǎn) 化 生 長(zhǎng) 因 子β１（ＴＧＦ－β１）及苦參堿的抗纖維化作用,，為臨床防治腹膜纖維化,，延緩病人的生命，有著極其重要的現(xiàn)實(shí)意義,。

１ 材料與方法

１．１ 材 料 選 取 健 康 ＢＡＬＢ／ｃ大 鼠 ３５ 只,，雌 雄 兼 用，體 重１００～１２０ｇ,，同等條件下 飼 養(yǎng),，鼠 齡６～８周，由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,。

１．２ 主要試劑 胎牛血清（ＦＣＳ）,，ＤＭＥＭ－Ｆ１２ＢＭＳＣ培養(yǎng)基，胰蛋白酶液,，卵母細(xì)胞裂解液,，ＤＡＢ顯色劑（編號(hào) ＡＲ１０２２），抗體稀釋液（編號(hào) ＡＲ１０１６）,，Ｈａｎｋｓ平衡 鹽 溶 液,，多 聚 賴 氨 酸，枸櫞酸鹽緩沖液,，以上均購(gòu)自鄭州益康生物工程有限公司,；ＴＮＦ－αＥＬＩＳＡ 試 劑 盒 （上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，編 號(hào)：ＡＲ２０５３）,；ＴＧＦ－β１ ＥＬＩＳＡ 試劑 盒（上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司,，編號(hào)：ＡＲ２０９５）；即用型 ＳＡＢＣ 免疫組化染色試劑盒（上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司,，編號(hào)：ＳＡ１０２０）,；兔抗人細(xì)胞角蛋白１８抗體、抗人波形蛋白（上海聯(lián)碩生物科技有限公司）,；兔抗 人 第Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體（上海聯(lián)碩生物科技有限公司）,；２．５％、４．２５％腹膜透析液２Ｌ（廣州 百 特 公 司）；苦參 堿 注 射 液,，每 支１５０ｍｇ（１０ ｍＬ）,，山西振東泰盛制藥有限公司,，批 號(hào)Ｈ２００５９３３５,。

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