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Elisa實(shí)驗(yàn)比色方法

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 Elisa實(shí)驗(yàn)比色方法,,酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀,通常指于測(cè)讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計(jì),。針對(duì)固相載體形式的不同,,各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計(jì),。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測(cè)讀速度,、讀數(shù)的準(zhǔn)確性,、重復(fù)性、度和可測(cè)范圍,、線性等等,。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.001,,準(zhǔn)確性為±1%,重復(fù)性達(dá)0.5%,。舉例說,,若某孔測(cè)得的A值為1.083,,則該孔相對(duì)于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為1.083±0.01(1.073~1.093),重復(fù)測(cè)定數(shù)次,,其A值均應(yīng)1.083±0.05(1.078~1.088)在之間,。酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,,新型號(hào)的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900,,甚至更高。超出可測(cè)上限的A值常以"*"或"over"或其它符號(hào)表示,。應(yīng)注意可測(cè)范圍與線性范圍的不同,,線性范圍常小于可測(cè)范圍,比如某一酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍為0.000~2.900,,而其線性范圍僅0.000~2.000,,這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)予注意。
酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,,操作時(shí)室溫宜在15~30℃,,使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定。 
         
Elisa實(shí)驗(yàn)比色方法,,測(cè)讀A值時(shí),,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長,。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測(cè)讀,,即每孔先后測(cè)讀兩次,*次在zui適波長(W1),,第二次在不敏感波長(W2),,兩次測(cè)定間不移動(dòng)ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,,630nm為W2,,zui終測(cè)得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。

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