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Elisa實驗比色方法
閱讀:596 發(fā)布時間:2011-9-13 Elisa實驗比色方法,酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀,通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計,。針對固相載體形式的不同,各有特制的適用于板,、珠和小試管的設(shè)計,。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀,。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測讀速度,、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性,、度和可測范圍,、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.001,,準(zhǔn)確性為±1%,,重復(fù)性達(dá)0.5%。舉例說,,若某孔測得的A值為1.083,,則該孔相對于空氣的真實A值應(yīng)為1.083±0.01(1.073~1.093),重復(fù)測定數(shù)次,,其A值均應(yīng)1.083±0.05(1.078~1.088)在之間,。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,,新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900,,甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示,。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同,,線性范圍常小于可測范圍,,比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000~2.900,而其線性范圍僅0.000~2.000,,這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)予注意,。
酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,操作時室溫宜在15~30℃,,使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,,測讀結(jié)果更穩(wěn)定。
Elisa實驗比色方法,,測讀A值時,,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長,。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀,,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),,第二次在不敏感波長(W2),,兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,,630nm為W2,,zui終測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。