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ELISA中常見問題及解決方法

1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,，嚴格按照試劑說明書進行操作,，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣,； 2）手工操作中,，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）； 3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外,。解決辦法： 1） 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后,，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘,；若在幾天內(nèi)檢測,，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存,，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi),。 2） 加樣后及時放入孵箱。 3） 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干,。 4） 如果采用AT或其他全自動加樣,，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5） 標本較多時,，請分批操作,。
3 孵育 可能原因： 1） 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā),，吸附于孔壁,，難于清洗*； 2） 孵育時間人為延長,，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,，難以清洗*。解決辦法： 1） 貼封片或加蓋,； 2） 按說明步驟嚴格控制操作時間,。
4 洗板 可能原因： 1） 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2） 采用半自動洗板機洗板時,，洗液量不足,，導(dǎo)致洗板不*,；洗板針堵塞，抽吸不*,；洗板不暢,，導(dǎo)致洗板效果差。 3） 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長,。 解決辦法： 1） 保證洗液注滿各孔,，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈,、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干,； 2） 合理安排，或多用幾臺洗板機,。
5 顯色 可能原因： 1） 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑,； 2） 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1） 顯色劑盡量在臨用前配制,，堅持不用過期顯色劑,，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2） 加樣時保持顯色劑不外流,； 3） A,、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止 可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,，導(dǎo)致假陽性增加,。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板 如讀板時板底不清潔等,。應(yīng)保證酶標板清潔,。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質(zhì)量,。