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ELISA中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法
閱讀：448 發(fā)布時(shí)間：2011-9-6| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 21KB |
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ELISA中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法
1 選擇試劑 選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣,； 2）手工操作中,，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）,； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決辦法： 1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后,，再用3000rmp離心15分鐘,；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,，放置一段時(shí)間后,，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè),，可放在2-8℃冰箱中,，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi),。 2） 加樣后及時(shí)放入孵箱,。 3） 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 4） 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。 5） 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作,。
3 孵育 可能原因： 1） 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁,，難于清洗*,； 2） 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,，難以清洗*,。解決辦法： 1） 貼封片或加蓋； 2） 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,。
4 洗板 可能原因： 1） 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉,。 2） 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足,，導(dǎo)致洗板不*,；洗板針堵塞，抽吸不*,；洗板不暢,，導(dǎo)致洗板效果差。 3） 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng),。 解決辦法： 1） 保證洗液注滿各孔,，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈,、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干,； 2） 合理安排,，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5 顯色 可能原因： 1） 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑,； 2） 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流,。解決辦法： 1） 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用,； 2） 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 3） A,、B液應(yīng)避免接觸金屬器械,。
6 終止 可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加,。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡,。
7 讀板 如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔,。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。