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ELISA中常見問題及解決方法

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ELISA中常見問題及解決方法

1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,,嚴格按照試劑說明書進行操作,,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣 可能原因: 1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣,; 2)手工操作中,,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外,。解決辦法: 1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘,;若在幾天內(nèi)檢測,,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi),。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干,。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣,,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時,,請分批操作,。

3 孵育 可能原因: 1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),,吸附于孔壁,,難于清洗*; 2) 孵育時間人為延長,,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,,難以清洗*。解決辦法: 1) 貼封片或加蓋,; 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間,。
4 洗板 可能原因: 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時,,洗液量不足,,導(dǎo)致洗板不*,;洗板針堵塞,抽吸不*,;洗板不暢,,導(dǎo)致洗板效果差。 3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長,。 解決辦法: 1) 保證洗液注滿各孔,,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈,、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干,; 2) 合理安排,或多用幾臺洗板機,。
5 顯色 可能原因: 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑,; 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法: 1) 顯色劑盡量在臨用前配制,,堅持不用過期顯色劑,,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流,; 3) A,、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止 可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,,導(dǎo)致假陽性增加,。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板 如讀板時板底不清潔等,。應(yīng)保證酶標板清潔,。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量,。

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