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犬瘟熱病毒（CDV）ELISA試劑盒使用說明
閱讀：338 發(fā)布時間：2017-6-2
犬瘟熱病毒（CDV）ELISA試劑盒使用說明 |
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本試劑盒僅供研究使用。 |
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檢測范圍： | 96T |
2ng/L - 50ng/L |
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使用目的：
本試劑盒用于測定犬血清,、血漿及相關液體樣本中瘟熱病毒（CDV）含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中犬瘟熱病毒（CDV）水平。用純化的犬瘟熱病毒抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入瘟熱病毒（CDV），再與
HRP 標記的瘟熱病毒抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的瘟熱病毒（CDV）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD
值）,，通過標準曲線計算樣品中犬瘟熱病毒（CDV）濃度,。
試劑盒組成
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
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2 | 酶標試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標準品（96ng/L） | 0.5ml×1 瓶 |
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3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
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4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
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5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
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6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
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標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
- 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
48ng/L | 5 號標準品 | 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
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24ng/L | 4 號標準品 | 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
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12ng/L | 3 號標準品 | 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
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6ng/L | 2 號標準品 | 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
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3ng/L | 1 號標準品 | 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
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- 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,，
然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
- 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
- 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
- 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此重復 5 次，拍干,。
- 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl,，空白孔除外。
- 溫育：操作同 3,。
- 洗滌：操作同 5,。
- 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
- 終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
- 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行,。
操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完,，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內,，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔*孔的 OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6 個月