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猴粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒
閱讀:191 發(fā)布時間:2017-4-28
猴粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T
30ng/L - 1000ng/L
使用目的:
本試劑盒用于測定猴血清,、血漿及相關液體樣本中粒細胞集落刺激因子(G-CSF)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中猴粒細胞集落刺激因子(G-CSF)水平,。用純化的
猴粒細胞集落刺激因子(G-CSF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次
加入粒細胞集落刺激因子(G-CSF),再與 HRP 標記的粒細胞集落刺激因子(G-CSF)抗體結合,,
形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催
化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的粒細胞集落刺激因子(G-CSF)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),,通過標準曲線計算樣品中猴粒細胞集落刺激因子(G-CSF)濃度,。
試劑盒組成
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
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2 | 酶標試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標準品(2000ng/L) | 0.5ml×1 瓶 |
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3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
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4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
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5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
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6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
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標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
- 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
1000ng/L | 5 號標準品 | 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
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500ng/L | 4 號標準品 | 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
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250ng/L | 3 號標準品 | 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
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125ng/L | 2 號標準品 | 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
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62.5ng/L | 1 號標準品 | 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
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- 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、標準孔,、
待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。
- 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
- 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
- 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,,如此重復 5 次,,拍干,。
- 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外,。
- 溫育:操作同 3,。
- 洗滌:操作同 5。
- 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,,再加入顯色劑 B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色
10 分鐘.
- 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。
- 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值),。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,,根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的 OD 值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未
用完,,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結果,。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,,以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內(nèi),,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值
大于標準品孔*孔的 OD 值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存,。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:,;2-8℃,。
2.有效期:6 個月