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猴粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）ELISA試劑盒
閱讀：190 發(fā)布時間：2017-4-28
猴粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
30ng/L - 1000ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測定猴血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)含量,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中猴粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)水平。用純化的
猴粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次
加入粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF),，再與 HRP 標(biāo)記的粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)抗體結(jié)合,，
形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催
化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中猴粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)濃度。
試劑盒組成
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
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2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品（2000ng/L） | 0.5ml×1 瓶 |
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3 | 酶標(biāo)包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
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4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
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5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
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6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
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標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
- 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
1000ng/L | 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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500ng/L | 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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250ng/L | 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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125ng/L | 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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62.5ng/L | 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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- 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
- 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
- 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次,，拍干,。
- 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外,。
- 溫育：操作同 3,。
- 洗滌：操作同 5。
- 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
- 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
- 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
操作程序總結(jié)：
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期：6 個月