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IL-32,BIM人白細(xì)胞介素32 ELISA試劑盒說明書
閱讀:203 發(fā)布時(shí)間:2016-11-30提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 111KB |
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IL-32,BIM人白細(xì)胞介素32 ELISA試劑盒說明書
l 本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清,、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人白細(xì)胞介素32(IL-32)的含量,。
l 有效期:6個(gè)月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),。往預(yù)先包被人白細(xì)胞介素32(IL-32)捕獲抗體的包被微孔中,,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人白細(xì)胞介素32(IL-32)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),,計(jì)算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘,,取上清即可檢測(cè),,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,,并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融,。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,,取上清檢測(cè)。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,,取上清即可檢測(cè),,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
標(biāo)本處理
1. 本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),,不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),,請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本,。
2. 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量,,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋,,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍,,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2),。
3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,并注意留存樣本,。
4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
5. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,,因該類樣本干擾因素較多,,如:細(xì)胞狀態(tài),、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,,所以可能存在檢測(cè)不出的情況,。
6. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,,而不被檢測(cè)出。
7. 建議使用新鮮樣本,,保存時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差,。
需要而未提供的試劑和器材
- 酶標(biāo)儀(450nm)
- 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
- 37℃恒溫箱
- 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 8孔×12條 | 8孔×6條 | 無 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測(cè)抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 無 |
備注:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:120、60,、30,、15、7.5,、0 pg/mL
2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
- 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑。
- 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
- 消除板底殘留的液體和手指印,,否則影響OD值,。
- 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。
- 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果,。
- 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
- 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
- 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體,。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
- 不能使用過期產(chǎn)品,。
- 如果可能傳播疾病,,所有的樣品都應(yīng)管理好,,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。