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IL-32,BIM人白細(xì)胞介素32 ELISA試劑盒說明書

閱讀:202          發(fā)布時間:2016-11-30
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IL-32,BIM人白細(xì)胞介素32 ELISA試劑盒說明書

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿,、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人白細(xì)胞介素32IL-32)的含量。

有效期:6個月

保存條件:2-8℃

本試劑盒僅供體外研究使用,,不用于臨床診斷

 

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),。往預(yù)先包被人白細(xì)胞介素32(IL-32)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人白細(xì)胞介素32(IL-32)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度,。

 

樣本處理及要求

1.  血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘,,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.  血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),,稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,,于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,,或反復(fù)凍融,。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測,。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測,。


標(biāo)本處理

1.  本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,,預(yù)留充足的樣本。

2.  實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,,如果標(biāo)本濃度過高,,應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。

3.  若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,,并注意留存樣本。

4.  使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差,。

5.  若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài),、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況,。

6.  某些天然蛋白或重組蛋白,,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,,而不被檢測出,。

7.  建議使用新鮮樣本,,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

 

需要而未提供的試劑和器材

  • 酶標(biāo)儀(450nm)
  • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL
  • 37℃恒溫箱
  • 蒸餾水或去離子水

 

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

8孔×12條

8孔×6條

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:120,、60,、30、15,、7.5,、0 pg/mL

2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),,實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。

 

注意事項(xiàng)

  • 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑,。
  • 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。
  • 消除板底殘留的液體和手指印,,否則影響OD值。
  • 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。
  • 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
  • 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射,。
  • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
  • 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。
  • 不能使用過期產(chǎn)品,。
  • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。

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