日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當前位置:
上海恒遠生物科技有限公司>資料下載>還原性谷胱甘肽GSH檢測方法推薦

資料下載

還原性谷胱甘肽GSH檢測方法推薦

閱讀:753          發(fā)布時間:2016-3-16
提 供 商 上海恒遠生物科技有限公司 資料大小 47KB
資料圖片 下載次數(shù) 1058次
資料類型 WORD 文檔 瀏覽次數(shù) 753次
免費下載 點擊下載    

Beutler改良法測定組織GSH操作規(guī)程

  • 原理及意義

原理:DTNB能被-SH基團還原,,產(chǎn)生等克分子的2-硝基-5-巰基苯甲酸,,而苯甲酸陰離子在一定PH值條件下呈黃色,在412 nm波長下有吸收峰,。

意義:還原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)是一種低分子自由基清除劑,,它可清除O2˙ H2O2,、LOOH,。GSH是蛋氨酸,、甘氨酸和半胱氨酸組成的一種小分子肽,是組織中主要的非蛋白質(zhì)的巰基化合物,,并且是谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)和谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)兩種酶類的底物,,為這二種酶分解氫過氧化物所必需,能穩(wěn)定含巰基的酶和防止血紅蛋白及其它輔因子受氧化損傷,,zui近還證明GSH也參與使Vit E恢復(fù)到還原態(tài)的作用,。GSH測定值的高低可間接反映機體發(fā)生氧化損傷的程度。

  • 器材

可見光分光計,、7 ml離心管和管架,、加樣器和槍頭

  • 試劑

① 1 mmol/LGSH(標準品);

② 1%檸檬酸鈉,;

二硫雙基苯甲酸(dithio-bis-nitrobenzoicacid, DTNB)試劑:用1%檸檬酸鈉配成終濃度0.04%(w/v),;

④ 20%三氯醋酸;

⑤ 0.3 mol/L磷酸氫二鈉(Na2HPO4)緩沖液,。

  • 步驟

1、樣品處理及試驗步驟下面以肝臟組織為例

稱取一定量的肝臟組織于冰冷0.85%生理鹽水中漂洗,,濾紙吸干表面水分,,燒杯內(nèi)剪碎     制備20%組織勻漿液(須用0.85%生理鹽水或三蒸水)    4000 g離心10 min后取上清液      按上清液:20%三氯醋酸(體積比)為2:1混合(加TCA前留取20 μl上清液用于Lowry法測蛋白)     混勻,4000 g離心10 min(此步離心要充分,,可適當提高離心力)     收集上清液按表2測定,。

2、按下表1繪制標準曲線(單位:ml

1 GSH標準曲線的測定

GSHμmol/L

0

10

20

30

40

50

1 mmol/LGSH

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

三蒸水

0.5

0.45

0.4

0.35

0.3

0.25

磷酸鹽緩沖液

4.0

4.0

4.0

4.0

4.0

4.0

DTNB試劑

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

混勻,,5 min內(nèi)于412nm比色,,以三蒸水調(diào)零,以標準GSH濃度為X軸,,相應(yīng)吸光值為Y軸,,繪制標準曲線,并求回歸方程,。

3,、按下表2操作測定樣品GSH(單位:ml

2  Beutler改良法樣品測定操作

測定管

空白管

待測樣品液

0.1

0

磷酸鹽緩沖液

4.4

4.4

DTNB試劑

0.5

0.5

三蒸水

0

0.1

測得的吸光值代入回歸方程,可計算出樣品液的GSH濃度,。

  • 實驗結(jié)果

1,、標準曲線結(jié)果

GSH濃度(μmol

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

A

0.000

0.126

0.260

0.394

0.529

0.666

根據(jù)上數(shù)據(jù)測得標準曲線方程為:

X(μmol)=0.3744898 Y+0.0017227(其中Y為吸光值,標準曲線看Figure 1

Figure 1  GSH標準曲線圖

  • 注意事項
  • 樣品應(yīng)冰上勻漿,,所有步驟盡量保證低溫下操作,,否則結(jié)果偏低;
  • 所有用水均需三蒸水,,否則結(jié)果偏低,;
  • 未經(jīng)蛋白變性處理的樣品在-20不宜存放,;
  • 反應(yīng)管內(nèi)zui終PH值必須保證在8.09.0間,否則結(jié)果不穩(wěn)定,;
  • 配好的DTNB應(yīng)在有限期內(nèi)使用(4下可存1個月),;
  • GSH濃度低時顯色快,消退也快,;濃度高時顯色慢,,消退也慢,一般反應(yīng)15 min后測定(不要超過5 min),;
  • 反應(yīng)總體積可調(diào)為2.5 ml,。

 

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功,!我們將在第一時間回復(fù)您~

對比框

產(chǎn)品對比 產(chǎn)品對比 聯(lián)系電話 二維碼 意見反饋 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪
在線留言