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植物過氧化物酶（POD）ELISA操作說明
閱讀：217 發(fā)布時間：2015-12-31| 提 供 商 | 上海恒遠生物科技有限公司 | 資料大小 | 179.1KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 217次 |
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植物過氧化物酶（POD）ELISA檢測方法說明
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
5U/L - 160U/L
使用目的： 本試劑盒用于測定植物組織,，細胞及其它相關(guān)樣本中過氧化物酶（POD）含量,。
實驗原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中植物過氧化物酶（POD）水平。用純化的植物過
氧化物酶（POD）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入過氧化物 酶（POD），再與 HRP 標(biāo)記的過氧化物酶（POD）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合 物,，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作 用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的過氧化物酶（POD）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在
450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中植物過氧化物酶（POD）濃 度,。
試劑盒組成
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能 馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋,。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、
待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,， 然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此 重復(fù) 5 次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結(jié)：
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計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),， 即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。 保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期：6 個月