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WIF-1 ELISA試劑盒說明書

閱讀:324          發(fā)布時(shí)間:2015-12-18
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大鼠WIF-1酶聯(lián)免疫分析

 

 

試劑盒使用說明書

 

 

本試劑盒僅供研究使用,。

 

 

檢測(cè)范圍:                                                          96T

 

60ng/L-200ng/L

 

 

使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本 WIF-1 含量,。 實(shí)驗(yàn)原理

本試盒應(yīng)用雙體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠 WIF-1 水平,。用純化的大 WIF-1 抗體

孔板制成相抗,,往被單的微中依 WIF-1,,再 HRP 標(biāo) WIF-1 結(jié),形成--標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)加底TMB ,。TMB HRP 催化轉(zhuǎn)化藍(lán),并酸的用下轉(zhuǎn)化成zui黃色,。顏色深淺樣品WIF-1 呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測(cè)定吸光度(OD ,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品 中大鼠 WIF-1 濃度,。

試劑盒組成

 

標(biāo)本要

1標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

操作步

1.     標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋,。

 

 

 

 

2.     樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔,、

測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,,

后再加待測(cè)樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 ,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,。

3.     溫育:用封板膜封板后置 37溫育 30 分鐘,。

4.     配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.     滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置 30 后棄去,,如此 重復(fù) 5 次,拍干,。

6.     加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,,空白孔除外。

7.     溫育:操作同 3,。

8.     洗滌:操作同 5,。

9.     色:每孔先加入顯色劑 A50µl再加入顯色劑 B50µl,,輕輕震蕩混勻,,37光顯色

10 分鐘.

10.  終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

11.   測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm 長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

操作程序總結(jié):

 

 

計(jì)

標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo),,OD 縱坐標(biāo)標(biāo)紙繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,,根據(jù)樣OD 由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,,將樣品的 OD 代入方程式,,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),,

 

即為樣品的實(shí)際濃度,。 注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未

用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間 控制在 5 分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。

4 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值),,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,,計(jì) 算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。

6.底物請(qǐng)避光保存。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。 保存條件及有效期

1試劑盒保存:,;2-8

2.有效期:6 個(gè)月

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