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ELISA方法檢測糖類抗原19-9（CA19-9）原理
閱讀：297 發(fā)布時間：2015-10-19| 提 供 商 | 上海恒遠生物科技有限公司 | 資料大小 | 134.5KB |
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人糖類抗原19-9（CA19-9）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍： 96T
50U/L -2200U/L
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中糖類抗原 19-9（CA19-9）含量。 實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人糖類抗原 19-9（CA19-9）水平,。用純化的抗 體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入糖類抗原 19-9（CA19-9）,，再 與 HRP 標記的抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯 色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺 和樣品中的糖類抗原 19-9（CA19-9）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中人糖類抗原 19-9（CA19-9）濃度,。
試劑盒組成
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標準品（4000U/L） | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋,。
2000U/L | 5 號標準品 | 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
1000U/L | 4 號標準品 | 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
500U/L | 3 號標準品 | 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
250U/L | 2 號標準品 | 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
125U/L | 1 號標準品 | 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡 量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結(jié)：
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實際濃度,。 注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值 大于標準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。 保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個月