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RD雞干擾素-y試劑盒中文說(shuō)明書(ELISA方法)

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RD雞干擾素-y試劑盒中文說(shuō)明書(ELISA方法)

·本試劑僅供研究使用  
·試驗(yàn)原理:
    IFN-Y試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知IFN-Y濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品 加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將IFN-Y和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育,。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP,。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A,、B,,和酶結(jié)合物同時(shí)作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IFN-Y的濃度呈比例關(guān)系,。

_________________________________________________________________________________
·自備材料:
  1.蒸餾水,。
  2.加樣器:5ul、10ul,、50ul,、100ul,、200ul、500ul,、1000ul,。
  3.振蕩器及磁力攪拌器等,。

·樣品收集、處理及保存方法:
  1.血清……操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
  2.血漿……EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
  3.細(xì)胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4.組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,,取上清液。
  5.保存……如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

·安全性:
  1.避免直接接觸終止液和底物A、B,,一旦接觸到這些液體,,請(qǐng)盡快用水沖洗。
  2.實(shí)難中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。
  3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

·試劑的準(zhǔn)備:
  1.標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,,不能儲(chǔ)存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
400
pg/ml    (6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)    原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
200
pg/ml    (5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)    100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100
pg/ml    (4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)    100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50
pg/ml    (3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)    100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25
pg/ml    (2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)    100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12.5
pg/ml    (1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)    100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0
pg/ml    (空白對(duì)照)    原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
  2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋,。

·試劑盒性能:
  1.靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
  2.特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。
  3.重復(fù)性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。
 

·結(jié)果判斷與分析:
  1.儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
  2.以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),,相應(yīng)的IFN-Y標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),,做得相應(yīng)的曲線,樣品的IFN-Y含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實(shí)際濃度。
  3.檢測(cè)值范圍:0-400pg/ml
  4.敏感度:1.0pg/ml

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