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ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的所需條件
閱讀：185 發(fā)布時(shí)間：2014-9-3| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 69.2KB |
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血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)留意避免溶血,，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)開釋出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。如在冰箱中保留過久,，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深,。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操縱步驟的留意要點(diǎn)，珠式,、管式及磁性球ELSIA,，國外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用,，嚴(yán)格遵照劃定操縱,，必能得出正確的結(jié)果,。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,，避免加在孔壁上部,，并留意不可濺出,，不可產(chǎn)氣憤泡,。有此測(cè)定(如間接法ELISA)需用稀的血清,，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣,。
ELISA的操縱因固相載體的形成不同而有所差異,，海內(nèi)醫(yī)學(xué)檢修一般均用板式點(diǎn),。除特殊情況外,，在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器,，使加液過程迅速完成,。如有細(xì)菌污染,，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng),。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,，以發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣。的試劑,，良好的儀器和準(zhǔn)確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果正確可靠的必要條件,。ELISA頂用的蒸餾 水或去離子水,，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的,。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定(如血清,、尿液),，有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物),。
在ELISA中一般有3次加樣步聚,，即加標(biāo)本,，加酶結(jié)合物,，加底物,。凍結(jié)血清融解后,，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均,，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡,，可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩,。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固,、血塊收縮后即可取得,。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標(biāo)本,，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和,。一般說來，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,，超過一周測(cè)定的需低溫冰存?？捎米鱁LISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,，體液(如血清 ),、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體 或抗原成份,，ELISA試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保留,。