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進口試劑盒實驗需要考慮的方面
閱讀:224 發(fā)布時間:2014-5-6提 供 商 | 上海恒遠生物科技有限公司 | 資料大小 | 59KB |
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進口試劑盒實驗需要考慮的方面
1,、標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。
2,、血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,,如為有菌操作,,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,,應(yīng)在-70℃以下,。
3、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,,一則細菌的生長,,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾,。
4,、在冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,,從而引起假陰性結(jié)果,。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,,不要進行劇烈振蕩,,反復(fù)顛倒混勻即可,。
5、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血,。血紅蛋白中含有血紅素基團,,其有類似過氧化物的活性,因此,,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中,,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色,。
實驗過程注意
1、當(dāng)混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩,,避免起泡,。
2、不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑,。
3,、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔,。
進口試劑盒實驗結(jié)果判斷
1,、陰性對照呈無色或淺黃色,陽性對照呈明顯黃色,,表示試驗有效,。
2、以空白對照調(diào)零,,用酶標(biāo)儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度(A值),。待檢孔A值大于陰性對照A值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對照A值的平均值低于0.08時按0.08計算,。