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    應(yīng)用酶標(biāo)抗體進(jìn)行免疫測(cè)定的方法較多，非均相酶免疫測(cè)定是目前應(yīng)用zui廣泛的一類酶免疫檢測(cè)技術(shù),，其中以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)zui常用，它可用于測(cè)定抗體,，也可測(cè)定可溶性抗原及細(xì)胞抗原,。而酶-抗酶復(fù)合物多用于免疫組織化學(xué)。以下著重介紹ELISA和免疫酶組化技術(shù),。
試劑及配制
1、洗滌液（pH 7.4 PBS)
     KH2PO4              0.2g
     Na2HPO4·12H20      2.9g
     NaCl               8.0g
     KCl                0.2g
     蒸餾水加至         1000ml
2,、一抗或配體和酶標(biāo)抗體
操作方法
1,、將不同數(shù)量的陽(yáng)性或陰性細(xì)胞與不同濃度的抗體進(jìn)行反應(yīng),，用以確定zui適細(xì)胞數(shù)和抗體的工作濃度；
2,、將細(xì)胞懸液于4℃,，1500r/min離心5min，棄上清,，重懸于冰冷的洗滌液中，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度,；
3,、取錐形或圓形凹孔板，加入zui適細(xì)胞數(shù)（1-5´105個(gè)/孔）,，100ml/孔，4℃,，1500r/min離心5min,，吸去上清；
4,、混合器短時(shí)振搖，使沉淀的細(xì)胞分散,；
5,、加入一定稀釋度抗體或配體，4℃孵育1.5h，間隔15min輕輕振搖一次,；
6,、4℃，1500r/min離心5min,，吸去上清,；用洗滌液洗滌3次，棄上清,；
7、加入zui適工作濃度酶標(biāo)抗抗體或酶標(biāo)抗體（抗配體）,，4℃孵育1.5h,，間隔15min輕輕振搖一次；
8,、4℃，1500r/min離心5min,，吸去上清,；用洗滌液洗滌3次，棄上清,；
9,、加入底物溶液,，100ml/孔，避光室溫顯色20-30min,，間隔10min輕輕振搖一次,；
10、4℃,，1500r/min離心5min，轉(zhuǎn)移上清至空孔中,，用酶聯(lián)檢測(cè)儀測(cè)定OD值,。