化工儀器網(wǎng)
資料下載
免疫組化實(shí)驗(yàn)方法及特點(diǎn)下載
閱讀：185 發(fā)布時(shí)間：2014-3-19| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 69KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 查看 | 下載次數(shù) | 50次 |
| 資料類(lèi)型 | PNG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 185次 |
| 免費(fèi)下載 | 點(diǎn)擊下載 |
今天周三了，這個(gè)星期的工作日只剩下兩天了,，時(shí)間過(guò)的真的很快,。今天上海恒遠(yuǎn)給朋友們分享一個(gè)相關(guān)實(shí)驗(yàn)知識(shí)，下面來(lái)看免疫組化實(shí)驗(yàn)方法及特點(diǎn)下載,。
步驟
1,、石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時(shí),，脫蠟至水,，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）,。
2,、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中,，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,，放入已沸騰的緩沖液中,，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻,，從緩沖液中取出玻片,，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’,。（恒遠(yuǎn)提醒注意：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的,，視具體情況而定）
3,、每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘,，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性,。PBS沖洗3×3’。
4,、除去PBS液,，每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)），室溫下孵育2小時(shí),。
5,、PBS沖洗3×5’。除去PBS液,，每張切片加1滴聚合物增強(qiáng)劑,，室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’,。
6,、除去PBS液，每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物,，室溫下孵育30分鐘,。PBS沖洗3×5’。
7,、除去PBS液,，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺），顯微鏡下觀察5分鐘,。
8,、蘇木素復(fù)染，0.1%HCl分化,，自來(lái)水沖洗,，藍(lán)化，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,，二甲苯透明,，中性樹(shù)膠封固，晾干后觀察,。
特點(diǎn)
1,、在切片加上一抗后，第二抗體標(biāo)記多聚螯合物酶（HRP）的復(fù)合物與一抗結(jié)合,，在多聚螯合物上有大量的HRP分子,，使抗原信號(hào)有顯著的放大，其敏感性較SABC,、SP法高,。
2,、由于多聚物在體內(nèi)不存在，又不使用生物素,，從而避免了由于生物素引起的非特異性背景染色,，背景比SABC、SP法清晰,。
3,、辣根過(guò)氧化物酶與二抗結(jié)合在多聚物上，替代傳統(tǒng)方法的 二抗,、三抗,，減少了實(shí)驗(yàn)步驟，且試劑孵育時(shí)間短,，只需15分鐘,，使得免疫組化方法更簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)時(shí)間比SABC,、SP法大為縮短,。