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    今天周三了,，這個(gè)星期的工作日只剩下兩天了,，時(shí)間過的真的很快,。今天上海恒遠(yuǎn)給朋友們分享一個(gè)相關(guān)實(shí)驗(yàn)知識(shí),，下面來看免疫組化實(shí)驗(yàn)方法及特點(diǎn)下載。

步驟
    1,、石蠟切片置于67℃烘箱中,，烘片2小時(shí)，脫蠟至水,，用pH7.4的PBS沖洗三次,，每次3分鐘（3×3’）,。
    2、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,，加入微波盒中,，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,，放入已沸騰的緩沖液中,，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻,，從緩沖液中取出玻片,，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’,。（恒遠(yuǎn)提醒注意：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的,，視具體情況而定）
    3、每張切片加1滴3%H2O2,，室溫下孵育10分鐘,，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’,。
    4,、除去PBS液,，每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)）,，室溫下孵育2小時(shí)。
    5,、PBS沖洗3×5’,。除去PBS液，每張切片加1滴聚合物增強(qiáng)劑,，室溫下孵育20分鐘,。PBS沖洗3×3’。
    6,、除去PBS液,，每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，室溫下孵育30分鐘,。PBS沖洗3×5’,。
    7、除去PBS液,，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺）,，顯微鏡下觀察5分鐘。
    8,、蘇木素復(fù)染,，0.1%HCl分化,，自來水沖洗，藍(lán)化,，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,，二甲苯透明，中性樹膠封固,，晾干后觀察,。
特點(diǎn)
    1、在切片加上一抗后,，第二抗體標(biāo)記多聚螯合物酶（HRP）的復(fù)合物與一抗結(jié)合,，在多聚螯合物上有大量的HRP分子，使抗原信號(hào)有顯著的放大,，其敏感性較SABC,、SP法高。
    2,、由于多聚物在體內(nèi)不存在,，又不使用生物素，從而避免了由于生物素引起的非特異性背景染色,，背景比SABC,、SP法清晰。
    3,、辣根過氧化物酶與二抗結(jié)合在多聚物上,，替代傳統(tǒng)方法的 二抗、三抗,，減少了實(shí)驗(yàn)步驟,，且試劑孵育時(shí)間短，只需15分鐘,，使得免疫組化方法更簡(jiǎn)單,，實(shí)驗(yàn)時(shí)間比SABC、SP法大為縮短,。