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豬表皮生長因子（EGF）試劑盒說明書下載
閱讀：188 發(fā)布時間：2013-11-20豬表皮生長因子（EGF）試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍： 48T
20pg/ml-480pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定豬血清,、血漿及相關(guān)液體樣本表皮生長因子（EGF）含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬表皮生長因子（EGF）水平,。用純化的豬表皮生長因子（EGF）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長因子（EGF）,，再與HRP標記的表皮生長因子（EGF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的表皮生長因子（EGF）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬表皮生長因子（EGF）濃度,。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 3ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 3ml×1瓶 | 8 | 標準品（960pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×4條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 3ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 3ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
- 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
480pg/ml | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
240pg/ml | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
120pg/ml | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
60pg/ml | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
30pg/ml | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
- 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
- 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
- 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
- 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干,。
- 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
- 溫育：操作同3,。
- 洗滌：操作同5,。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
- 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
- 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
- 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6個月