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四月技術總結交流ELISA標準曲線的繪制
閱讀:1944 發(fā)布時間:2016-4-14 在綿綿春雨的伴隨之下,四月已將近過半,。在這個月中,,您都有哪些收獲呢?上海恒遠公司結識了幾位客戶,,并為山東大學齊魯醫(yī)院李老師,、山西醫(yī)科大學俞老師等客戶解決實驗技術問題。今天上午,,我公司歐陽博士對四月技術做出總結,,與大家交流ELISA標準曲線的繪制。
一,、ELISA標準曲線繪制方法
①ELISA實驗中樣品都要做復孔或三孔,然后計算每個濃度標準品的平均OD值,,復孔的變異系數應該小于20%,。
②平均OD值減去空白孔的OD值。
③制作標準曲線,。
以減去本底后的OD值為X軸,,標準品的濃度為Y軸,利用作圖軟件得出一個合適的計算方法,。建議使用合適的軟件來作圖,,比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線,、半對數,、對數、四參數方程等)并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗某條曲線是否與表中數據吻合,,可以將標準品的濃度作為未知數,,將對應的OD值帶入該方程,計算出標準品的濃度,,得到的結果應該與實際濃度很接近(+/-10%),。選擇擬合度zui高的那條曲線。
二,、測定多個酶標板時是否可以使用同一條標準曲線,?
在測定不同板中的樣品時,每一個板都對應一條標準曲線,。技術錯誤或者不同的孵育情況,,環(huán)境條件都會引起酶標板之間產生不同結果。一條標準曲線測定的樣品值必需是在相同環(huán)境下產生的,,否則就是無效值,。
三、溫馨提示
如果樣品的OD值超過標準曲線的zui高值,,在實驗前應該先將樣品稀釋從而得到準確的濃度,。樣品的zui終度應該是計算出的濃度乘以稀釋倍數。
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