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恒遠(yuǎn)技術(shù)分析:elisa實(shí)驗(yàn)陰性對(duì)照需要做梯度稀釋嗎
閱讀:1519 發(fā)布時(shí)間:2015-11-11上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司主要ELISA試劑盒,主要合作對(duì)象是學(xué)校,,醫(yī)院,、研究所等科研單位。學(xué)??蛻粢孕率譃橹?。所以常有客戶咨詢未處理陰性對(duì)照需要做梯度稀釋嗎:以小鼠血清為例,小鼠的血清是直接拿來(lái)作為陰性對(duì)照,,還是要進(jìn)行稀釋,?如果要稀釋,該怎么稀釋才科學(xué),?
從理論上說(shuō),,陰性對(duì)照的血清,不論稀釋多少倍,,OD值都不應(yīng)該有明顯變化,。有兩種可能:
1.正常小鼠本身含有該抗原的抗體;
2.ELISA過(guò)程中非特異性反應(yīng)去除不干凈,,如洗板,、孵育溫度時(shí)間、抗原抗體濃度等,,這樣稀釋倍數(shù)越高的樣本其對(duì)結(jié)果的影響就越小,,就呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)。你的陰性孔的OD值有多少呢,,正常情況應(yīng)低于0.1,,不然就要優(yōu)化下整個(gè)實(shí)驗(yàn)體系了。
判斷陰陽(yáng)性,,以陰性O(shè)D值的2倍作為判斷標(biāo)準(zhǔn)只是根據(jù)我們一般的經(jīng)驗(yàn)而定,,更科學(xué)的方法是,測(cè)定一批陰性樣品(比如20個(gè)以上),,計(jì)算OD平均值及標(biāo)準(zhǔn)差,,以平均值+2或3倍標(biāo)準(zhǔn)差作為陰陽(yáng)性的界限。
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