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試劑盒資料研究結(jié)果發(fā)布
閱讀：1057 發(fā)布時間：2014-9-17 新的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目已經(jīng)開始執(zhí)行策劃了,，可能會有些實(shí)驗(yàn)新手面對ELISA的時候有些不知所措，在這之前掌握一些相關(guān)資料是肯定需要的,，我公司在前面的文章里面也介紹過不少,，今天上海恒遠(yuǎn)技術(shù)為您整理出了的試劑盒資料研究結(jié)果，一起來看下吧：
1. 在成批手工檢測中,，還應(yīng)注意操作時差的影響,。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時間不一致,，對競爭法及定量檢測影響很大,，不注意可能會導(dǎo)致錯誤結(jié)果或定量不準(zhǔn)。
2. 加樣一般使用加液器,，在ELISA中一般有4次加樣：加標(biāo)本,、加酶結(jié)合物,、加底物和加終止液。加標(biāo)本時必須每份標(biāo)本使用一支移液器吸嘴,，以免交叉污染,。加酶結(jié)合物、底物和終止液時則不需更換吸嘴,。
3. 洗滌是ELISA操作過程中決定實(shí)驗(yàn)成敗的一個關(guān)鍵步驟,。目的是除去未結(jié)合的免疫反應(yīng)物，終止抗原抗體反應(yīng),，除去標(biāo)本中與反應(yīng)無關(guān)的成分,、游離的酶標(biāo)物以及反應(yīng)過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。上海恒遠(yuǎn)建議可用洗板機(jī)洗板或手工洗板,，前者洗滌質(zhì)量較好,，各反應(yīng)孔洗滌效果均一，批內(nèi),、批間差異小,，手工洗板應(yīng)注意控制各孔洗滌效果，差異不宜太大,。
4. 準(zhǔn)確判定結(jié)果須使用ELISA測讀儀（酶標(biāo)儀）,，比色法判讀可選擇單波長或雙波長，根據(jù)反應(yīng)液顏色的不同選用不同波長的濾光片,，以空白孔校零測定反應(yīng)孔的吸光度值（A值）,。酶標(biāo)儀具有良好的重復(fù)性。
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本次的試劑盒資料中還包括了問題解決這一方面,，我們首先來看下“邊緣效應(yīng)”這一問題。其實(shí)也就是外周孔顯色較 中心孔深,。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所,。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測定中,，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱,，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時,，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃）,，就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”了，并且可提高測定的重復(fù)性哦,！
◇ 在ELISA實(shí)驗(yàn)中，血清為什么要稀釋,？
1. 競爭抑制比較明顯,，應(yīng)稀釋競爭物；
2. 血清中含有的性腺激素比較低,，應(yīng)該濃縮才對,。
血清稀釋用普通的PBS即可，可加1％的BSA,，能有效降低ELISA本底,，當(dāng)然如果你嫌麻煩我覺得用生理鹽水替代PBS關(guān)系也不大。不管你是用直接競爭還是間接競爭,，血清的稀釋倍數(shù)肯定要事先確定,，但也不用一點(diǎn)點(diǎn)，你做一個預(yù)試驗(yàn)即可,，選擇OD在1.0左右的稀釋倍數(shù),，即你的競爭ELISA中陰性孔OD在1.0，這樣作出來的曲線比較敏感,。
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ELISA試劑盒預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定血清、血漿,、組織勻漿或其它相關(guān)生物液體中目標(biāo)蛋白含量,。ELISA法由于本身所具備的*性，是一項(xiàng)很有發(fā)展前途的血清學(xué)診斷方法,，應(yīng)用領(lǐng)域也越來越廣泛,。可我們認(rèn)為ELISA不是萬應(yīng)良方,。因?yàn)镋LISA法還是有局限性,，ELISA中變異因素多，對于要診斷某一疾病時,，必須進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)室預(yù)試,，摸索，或?qū)嶒?yàn)研究，常用競爭法測定血清的溶度,。
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