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    一個(gè)春意濃重的清明小假過(guò)去啦，今天為止,，朋友們開始進(jìn)入正常的工作狀態(tài)中,。新的一周中，上海恒遠(yuǎn)給大家?guī)?lái)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)方法,，值得您看：進(jìn)口試劑盒來(lái)說(shuō)實(shí)驗(yàn)室制取質(zhì)粒的過(guò)程,。
    我們知道，質(zhì)粒是攜帶外源基因進(jìn)入細(xì)菌中擴(kuò)增或表達(dá)的主要載體,，它在基因操作中具有重要作用,。分離與提取是zui常用、zui基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù),。
    它的制取方法有很多的,，一般情況下來(lái),，大多都是包括了細(xì)菌的培養(yǎng),、細(xì)菌的收集和裂解,、質(zhì)粒DNA的分離和純化這三個(gè)步驟。而今天上海恒遠(yuǎn)給朋友們講說(shuō)的實(shí)驗(yàn)中,，是以以堿裂解法為例,，其中，我們要掌握堿裂解法抽提質(zhì)粒的原理,、步驟及各試劑的作用,。 
    所需物品：
1、含有質(zhì)粒pUC18載體的大腸桿菌菌液
2,、克隆有水稻外源片段的BAC的大腸桿菌菌液 
    取過(guò)程
1,、取含有pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌菌液于LA培養(yǎng)基上37℃過(guò)一個(gè)晚上培養(yǎng)； 
2,、用無(wú)菌牙簽挑取單菌落,，接種于含有Amp抗生素的LB培養(yǎng)基中，37℃搖床~250 r/min過(guò)一個(gè)晚上培養(yǎng),； 
3,、吸取1.5 ml菌液，12000 g離心2分鐘,，收集菌體,，倒掉菌液；吸取1.5 ml菌液,，再次收集菌體,，盡量將菌液倒干凈； 
4,、加入300 ml溶液 I振蕩打勻,重新懸浮細(xì)胞,，震蕩混勻（這里的時(shí)候，上海恒遠(yuǎn)提醒注意：應(yīng)*打勻沉淀或碎塊）,；
5,、加入300 ml溶液II，輕柔顛倒混勻,，放置至清亮,，一般不超過(guò)5分鐘； 
6,、加入300 ml溶液III顛倒混勻,，放置于冰上10分鐘，使雜質(zhì)充分沉淀,； 
7,、12000 g離心10分鐘； 
8,、吸取800 ml上清液（注意,！不要吸取到飄浮的雜質(zhì)）至另一Eppendorf管中,，加入2/3體積的異丙醇，室溫下放置5分鐘,； 
9,、12000 g 常溫離心15分鐘,； 
10、倒盡上清，加75％乙醇浸洗除鹽（放置片刻或離心3分鐘后倒去上清）,； 
11,、室溫放置或超凈臺(tái)上風(fēng)干DNA,； 
12,、加40 ml滅菌超純水或TE溶解； 
13,、質(zhì)粒,、BAC的質(zhì)量檢測(cè)，于-20℃保存. 
    我們這個(gè)實(shí)驗(yàn)的主要原理依據(jù)是在pH 12.0 ~ 12.6堿性環(huán)境中,，細(xì)菌的線性大分子量染色體DNA變性分開,，而共價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒DNA雖然變性但仍處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)。將pH調(diào)至中性并有高鹽存在及低溫的條件下,，大部分染色體DNA,、大分子量的RNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍然為可溶狀態(tài).通過(guò)離心,，可除去大部分細(xì)胞碎片,、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì),，質(zhì)粒DNA尚在上清中,，然后用酚、氯仿抽提進(jìn)一步純化質(zhì)粒DNA,。
    以上就是今天的的實(shí)驗(yàn)制取方法內(nèi)容啦,，我公司四月的新品進(jìn)口試劑盒上線啦，均是以七折大賣的,，需要的朋友們我公司何,。