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進口試劑盒講解ELISA法轉(zhuǎn)錄因子活性的特點與流程
閱讀:1534 發(fā)布時間:2014-4-1 今天是四月份的*天,,我們來給朋友們說說相關(guān)實驗方法,,就是相關(guān)ELISA的,這個方法的試劑盒在我公司的產(chǎn)品中是非常齊全的,,而且種屬也是繁多的,。下面我們來看進口試劑盒講解ELISA法轉(zhuǎn)錄因子活性的特點與流程。
我們首先來看看特點:
1,、靈敏度比凝膠遷移實驗高10倍,。轉(zhuǎn)錄因子水平小的變化就能對細胞功能產(chǎn)生極大的影響,因此,,在研究轉(zhuǎn)錄因子時采用靈敏的方法是非常重要的,。
、特異性強,。為了保證轉(zhuǎn)錄因子特異與生物素標記探針DNA結(jié)合,,試劑盒提供了未標記寡核苷酸片段(含有與標記探針相同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點),。此片段能夠與探針競爭結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子,減弱信號強度,。突變型的未標記寡核苷酸片段則不能與標記探針競爭結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子改變信號強度,。此外,抗轉(zhuǎn)錄因子一抗特異與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,,與其他蛋白無交叉反應(yīng),,確保試劑盒的特異性。
3,、快速,。EMSA需要凝膠電泳,操作費時又不方便,。使用轉(zhuǎn)錄因子活性ELISA檢測試劑盒,,能夠在5h內(nèi)得到結(jié)果。
4,、方便,、安全。不涉及放射性,,不用電泳,。
5,、可同時檢測1~96個樣品,。
6、能夠檢測組織及細胞樣品,。
再一個就是流程:
1,、核蛋白抽提物中轉(zhuǎn)錄因子與生物素標記探針結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄因子/探針復(fù)合物。
2,、轉(zhuǎn)錄因子/探針復(fù)合物與微孔板上鏈親和素結(jié)合固定在微孔板上,。
3、抗轉(zhuǎn)錄因子一抗與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,。
4,、HRP酶標二抗與一抗結(jié)合。
5,、HRP作用于底物發(fā)生顏色改變,,顏色深淺與轉(zhuǎn)錄因子DNA結(jié)合活性成正比。
由于ArrayStarTM轉(zhuǎn)錄因子活性ELISA試劑盒可以快速,、靈敏地檢測細胞核提取物中轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性,。試劑盒采用96微孔板,標記探針是生物素標記的雙鏈寡核甘酸片段,,含有轉(zhuǎn)錄因子的特異性DNA結(jié)合序列,。當標記探針與細胞核抽提物一起孵育時,,核抽提物中活性形式的轉(zhuǎn)錄因子與探針特異性結(jié)合,形成轉(zhuǎn)錄因子/探針復(fù)合物,。隨后,,轉(zhuǎn)錄因子/探針復(fù)合物與鏈親和素包被的微孔板孵育,轉(zhuǎn)錄因子/探針復(fù)合物通過與微孔板上鏈親和素結(jié)合,,被固定在微孔板上,。洗去未結(jié)合物,加入特異性一抗,,然后加入HRP標記的二抗及底物,,HRP催化底物發(fā)生顏色改變,根據(jù)顏色深淺即可檢測轉(zhuǎn)錄因子活性改變,。轉(zhuǎn)錄因子活性ELISA方法是建立在ELISA基礎(chǔ)上的高靈敏度的檢測方法,,也用于檢測哺乳動物組織或細胞中轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性,比傳統(tǒng)凝膠遷移實驗的靈敏度高10倍,,在5h內(nèi)就能完成,。不涉及放射性和凝膠電泳,安全簡便,,而且這種微孔板的形式能同時檢測1—96個樣品,。
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