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技術(shù)推廣抗體純化的檢測方法
閱讀：1530 發(fā)布時間：2013-8-5 純化抗體通常用于直接檢測抗原,。此時抗體標(biāo)記有一個易于鑒定的標(biāo)記物,，用于結(jié)合和檢測所研究的抗原,。在間接檢測抗原方法中,，一抗不被標(biāo)記,，而是用標(biāo)記的二抗（一種抗免疫球蛋白抗體）來檢測。一般而言,，建議使用間接法,。因?yàn)樵S多商家能夠提供可靠的標(biāo)記二抗,，用間接法不僅省力，結(jié)果同樣可靠,。
盡管如此,，有幾種方法需要標(biāo)記的一級抗體。例如,，在免疫染色試驗(yàn)中,，需要研究2個或2個以上抗原的相對位置時，常需要純化抗體并用不同標(biāo)記物標(biāo)記,，這樣能比較它們的相對位置,。此時使用間接法不合適。因?yàn)殚g接法是用標(biāo)記二抗來給未標(biāo)記的一抗定位,。又如,，有時一抗需要標(biāo)記，而該樣本中又有大量無關(guān)抗體,，它們能干擾對一抗的檢測,，此時用間接法也不合適。用鼠源性單抗對鼠組織抗原進(jìn)行定位時,，也會出現(xiàn)這種情況,。此時需要純化一抗，并直接按下述方法進(jìn)行標(biāo)記,。
免疫親和純化是另一種可能需要純化抗體的技術(shù),。在這一技術(shù)中，抗體共價交聯(lián)到一固相基質(zhì)上,，如交連的瓊脂糖或聚丙烯酰胺微球,。常用的方法是，先將抗體純化,，然后連接到通過化學(xué)方法激活而具有結(jié)合位點(diǎn)的微球上,。此時，抗體的純化對實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要,。
還有一種需要純化抗體的試驗(yàn),，是從多克隆抗血清中分離抗原特異性抗體。多克隆血清中含有復(fù)雜多樣的抗體,，它不僅含有針對免疫原產(chǎn)生的抗體,，還有血清的全部抗體。出于特定目的的需要,，必須將抗原的特異性抗體分離出來,。例如使用抗肽抗體時，需要分離出特異性識別肽段的抗體,。通過純化能獲得特異性很高的抗體,。純化抗體的另一用途是降低本底,。幾乎在所有技術(shù)中，使用純化抗體都能降低非特異性本底,。產(chǎn)生這種效果主要是因?yàn)橐环矫婺苋コ饘?shí)驗(yàn)誤差的污染蛋白,，另一方面能控制實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生陽性信號的抗體量。使用純化抗體不會使本底增加,，因此純化抗體可以作為所有免疫化學(xué)實(shí)驗(yàn)中降低本底的基本手段,。
抗體的純化通常是濃縮抗體的zui簡單方法。任何來源的抗體可以用蛋白A或蛋白G的純化方法來濃縮,。
盡管純化抗體的方法較多,，建議用蛋白A或蛋白G微球純化法作為zui常用的方法,。這種方法效率高,，能為常用的實(shí)驗(yàn)方法提供足夠純化的抗體，而且隨著商品化的蛋白A和蛋白G基質(zhì)的出現(xiàn),，能將任何來源的抗體純化,。抗體的純化也可采用傳統(tǒng)的色譜法,，在某些情況下非常有用,。這些方法包括DEAE離子交換色譜法、硫酸銨沉淀法及其他方法,。但是用蛋白G或蛋白A親和柱法純化較其他方法簡單,，并且純化效果是其他方法的數(shù)倍。因此在所有方法中,，我們推薦這種方法,。
有一種情況不適于應(yīng)用蛋白G或蛋白A親和柱純化抗體，即多克隆抗體需要進(jìn)一步分離,，且針對某種特異性抗原的組分需要分離,。此時可用抗原結(jié)合的親和柱純化抗原特異性抗體。這一特殊的純化方法,，將在后面討論,。
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