晚期糖基化終端產(chǎn)物（AGEs）檢測(cè)說(shuō)明書(shū)

越來(lái)越多的證據(jù)指出晚期糖基化終端產(chǎn)物（AGEs）修飾蛋白嚴(yán)重影響到老齡化人群的健康問(wèn)題。AGEs是葡萄糖與自由的蛋白質(zhì)氨基基團(tuán)發(fā)生非酶促糖基化反應(yīng)的終端不可逆代謝產(chǎn)物的總稱,。其在人體內(nèi)的積累會(huì)引發(fā)組織或器官一系列的病理性變化,，從而導(dǎo)致白內(nèi)障、阿爾茨海默氏病,、骨關(guān)節(jié)炎,、心功能不全等疾病發(fā)生。糖尿?。ǜ哐牵┎“l(fā)也與AGE在體內(nèi)積累速度加快有關(guān),。

研究發(fā)現(xiàn)AGEs的來(lái)源主要是葡萄糖，還有二羰基化合物,、短鏈還原糖和葡萄糖的其他代謝途徑,。目前確定結(jié)構(gòu)屬于AGE的單體化合物有CML、CEL,、Pentosidine, Pyrraline, Imidazolone, Crosslin等,，針對(duì)這些化合物和AGEs、AGE1～4生產(chǎn)的抗體大量應(yīng)用于生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,，發(fā)表的相關(guān)論文一一都證實(shí)了AGEs是老化,、與老化相關(guān)的慢性疾病發(fā)生的重要影響因素。

 

上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司晚期糖基化終端產(chǎn)物（AGEs）試劑盒*,，提供技術(shù)指導(dǎo),。您的咨詢與訂購(gòu)，：   手機(jī)    ：何

 

檢 測(cè) 原 理

葡萄糖來(lái)源的AGEs （Glc-AGEs）ELISA試劑盒利用的是基于“三明治”原理的固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。如右圖所示,，96孔板的表面有一層單克隆抗體涂層可直接識(shí)別樣品中Glc-AGEs的特異性抗原位點(diǎn),， 然后使用HRP標(biāo)記的anti-AGE抗體結(jié)合Glc-AGEs形成“三明治”復(fù)合物，zui后酶顯色對(duì)樣品進(jìn)行定性和定量研究,。

檢 測(cè) 對(duì) 象

人或其他動(dòng)物的純化蛋白,、血漿、血清和細(xì)胞裂解液,。

試 劑 盒 成 分

（1） Antibody coated microtiter plate, 96 wells, 1 plate

（2） Glucose-derived AGEs standard, 250 uL×2

（3） Reference standard and sample diluent, 15 mL×1

（4） HRP- anti AGEs antibody concentrate（×100）, 60 uL×1 （mouse monoclonal antibody）

（5） OPD （o-phenylendiamine） tablets, 2 tab.

（6） Substrate solution, 30 mL×1

（7） Stop solution, 15 mL×1

（8） Wash buffer concentrate （×20） , 30 mL×1

（9） Dilution plate, 1 plate

實(shí) 驗(yàn) 準(zhǔn) 備

工   作   液   配   制	清  洗  液	使用前確保wash buffer濃縮液內(nèi)無(wú)結(jié)晶顆粒，往30 ml的濃縮液內(nèi)加入570 ml去離子水即為工作液,，此溶液可以保存在2-8℃zui多放14天,。
	抗體稀釋液	用10倍體積的清洗液稀釋"Reference standard and sample diluent"即可。
	標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液	用等體積"Reference standard and sample diluent" 稀釋"Glucose-derived AGEs standard"（500ng/ml）,，如下圖所示,，依次配成250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, and 7.82 ng/ml的溶液。
	HRP標(biāo)記-AGEs 抗體（100×）	用5 ml 的抗體稀釋溶液稀釋50ul 的HRP-anti AGEs antibody濃縮液,，稀釋后的抗體不能保存,。
	顯  色  液	在使用前加1片OPD tablet到13 ml 底物溶液即可，此溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用,。
待測(cè)樣品的準(zhǔn)備		用"Reference standard and sample diluent"稀釋樣品,，若樣品濃度非常高，需用PBS進(jìn)行預(yù)稀釋,，zui后再調(diào)整濃度至100×或更高,。

 

實(shí) 驗(yàn) 準(zhǔn) 備

1	96孔板準(zhǔn)備	加入300 ul的清洗液至每個(gè)孔內(nèi)，溫育30 min,；*倒掉孔內(nèi)溶液后,，再加入300ul 清洗液。再重復(fù)此步2次,。
2	一 抗 反 應(yīng)	按50 ul/孔的量加入標(biāo)準(zhǔn)溶液,、稀釋樣品孵育1 hour，可以做兩個(gè)平行,。孵育完成后吸去反應(yīng)液,，用300 ul清洗液清洗3次。
3	二 抗 反 應(yīng)	加50 ul/孔的100倍稀釋的HRP- anti AGEs antibody,，孵育1 hour,。孵育完成后吸去反應(yīng)液，用300 ul清洗液清洗3次,。
4	顯       色	加100 ul/孔顯色液,，孵育10 min；
5	終 止 反 應(yīng)	加100ul/孔終止液終止酶顯色反應(yīng),；
6	讀取吸光度	酶標(biāo)儀在490 nm下讀取吸光值,；
7	計(jì) 算 結(jié) 果	使用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出AGEs的濃度,，使用4-Parameter Logistic Model分析數(shù)據(jù)。