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1） 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內(nèi)吹干或用細胞培養(yǎng)PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍,，再用細胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi),，種入細胞培養(yǎng)過夜,，使約為50%-80%滿。

2） 刺激細胞發(fā)生凋亡后,，吸盡培養(yǎng)液,，加入0.5ml固定液，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）,。

3） 去固定液,，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘,，吸盡液體,。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數(shù)次,。

4） 加入0.5ml Hoechst 33258染色液,，染色5分鐘。也宜用搖床,，或手動晃動數(shù)次,。

5） 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘,。

6） 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上,，蓋上貼有細胞的蓋玻片,，盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液,，切勿弄反,。

7） 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

 

2. 懸浮細胞

1） 離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內(nèi),，加入0.5ml固定液,，緩緩懸起細胞，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）,。

2） 離心去固定液,，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘,。洗滌期間手動晃動,。

3） zui后一次離心后吸去大部分液體保留約50ml液體，再緩緩懸起細胞,，滴加至載玻片上,，盡量使細胞分布均勻。

4） 稍晾干,，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動,。

5） 均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘,。用吸水紙從邊緣吸去液體,，微晾干。

6） 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,，每次3分鐘,。

7） 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片,，盡量避免氣泡,。

8） H. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

 

3. 組織切片

1） 常規(guī)包埋切片后,，脫蠟，透明,。

2） PBS或0.9%NaCl洗兩遍,，每次3分鐘，吸盡液體,。洗滌時宜用搖床,，或手動晃動數(shù)次?？稍诹装逯胁僮?。

3） 加入0.5ml Hoechst 33258染色液,，染色5分鐘。也宜用搖床,，或手動晃動,。

4） 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘,。

5） 將切片置于載玻片上,，滴一滴抗淬滅封片液，蓋上一潔凈的蓋玻片,，盡量避免氣泡,。

6） 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

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