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葡聚糖凝膠使用說明書
閱讀：2648 發(fā)布時間：2013-3-5葡聚糖凝膠 LH-20
適合用于有機溶劑分離嗜脂性分子,，天然產(chǎn)物在有機溶劑中的純化,。可以非常經(jīng)濟的大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物,，尤其在中藥有效成分提取中作為大孔吸附樹脂解析物的純化,。 結(jié)合凝膠過濾﹑分配色譜及吸附層析于一身，能分離結(jié)構(gòu)相近的分子,。因此使用中要考略幾種色譜的作用機制,。
zui高載量可達(dá)250mg樣品/ml凝膠﹑極少需要再生﹑使用得當(dāng)，分離效果可保持不變,。
上樣量視被分離物的結(jié)構(gòu)性能的差異而定：差異大,，則大；差異小,，則小,。凝膠過濾的上樣量一般為5-7％的床體積，我們建議初次上樣量控制在1-2％的床體積,，視分離情況可以逐步增加,；柱高的選擇也與分離要求相關(guān)——難分物質(zhì)要有一定柱高和流速控制；流動相可參考TLC的條件,，正確的流動相可以提高分離度并縮短分離時間,。
流動相的常用溶劑為：水、甲醇,、,、乙酸乙酯,、。
上述溶劑的極性依次降低,，對帶有極性的被分離物而言,，保留值和分離度依次遞增；同理選用的凝膠柱高可依次降低,，流速可以增大（或上樣量可以增加，樹脂體積在低極性溶劑中明顯收縮）,。
溶劑的溶解性,，極性，沸點,，毒性都是要考慮到的,，二氯甲烷通常對被分離物質(zhì)間的極性和堿性差異比較小時采用。甲醇通常對帶環(huán)狀（包括苯環(huán)）物質(zhì)分離采用,，葡聚糖凝膠對環(huán)狀物質(zhì)有強烈吸附,。LH-20同時具備親水和親脂雙重性質(zhì)，且被分離物質(zhì)的極性在分離過程中起著重要作用,。
1 葡聚糖凝膠LH-20的原理
葡聚糖凝膠LH-20的分離原理主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主,，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因為凝膠過濾作用,，所以大分子的化合物保留弱,，先被洗脫下來，小分子的化合物保留強,，zui后出柱,。如果使用反相溶劑洗脫，葡聚糖凝膠LH-20對化合物還起反相分配的作用,，所以極性大的化合物保留弱,，先被洗脫下來，極性小的化合物保留強,，后出柱,。如果使用正相溶劑洗脫，這主要靠凝膠過濾作用來分離,。
2 葡聚糖凝膠LH-20洗脫溶劑
葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類：反相和正相兩種,。用得zui多的是反相溶劑洗脫，以甲醇——水系統(tǒng)zui為常見,，先用水,，逐漸增加甲醇比例，zui后用100％甲醇沖柱,。正相系統(tǒng)以氯（仿）——甲醇zui為常見,，先用50％氯（仿）——甲醇,，逐漸增加甲醇比例，zui后用100％甲醇沖柱,。
3 樣品的處理和洗脫溶劑的選擇
如果樣品極性大,，選用反相溶劑洗脫（甲醇——水），樣品用zui少體積的甲醇——水（盡可能甲醇少一些）溶解,，過濾后,，濕法上樣（必須要進(jìn)行過濾！否則把葡聚糖凝膠LH-20 堵塞,，就必須將葡聚糖凝膠LH-20的柱頭部分棄去,，造成不必要的浪費）。如果樣品極性小,，這選用正相溶劑洗脫（氯（仿）——甲醇）,，樣品用zui少體積的氯（仿）——甲醇溶解，過濾后,，濕法上樣,。
4 葡聚糖凝膠 LH-20的使用方法
將干粉浸泡于60-70％乙醇中過夜（充分?jǐn)嚢瑁慈タ赡艽嬖诘臍埩粑?，抽干然后濕態(tài)不間隙裝柱,，不能出現(xiàn)凝膠斷層（否則要重新裝柱），動態(tài)用一倍柱體積的60-70％乙醇淋洗,，再用水洗凈乙醇即根據(jù)自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止,，如改變?nèi)軇?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì)，并根據(jù)性質(zhì)確定柱高,。如使用相同的溶劑,，在以后的層析中柱平衡可以省略。
（1） 選擇條件：
梯度洗脫在葡聚糖凝膠 LH-20使用中并不象在正相柱層析中那么重要,。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中,。極性在的用甲醇水系統(tǒng)；極性小者一般用不含水的系統(tǒng),，常用正己烷（二氯）甲烷甲醇系統(tǒng),。
（2）飽和層析柱：
用洗脫劑將凝膠搖勻，直立柱身,，讓其自然沉降,，此時要防止氣泡留在其中。至少半小時打開開關(guān),，流出幾個柱體種的洗脫劑,，目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中。
（3）樣品處理：
用盡量少的洗脫劑溶解樣品，常壓過濾,。
（4）濕法上柱：
這也是要有技巧的步驟,。
（5）洗脫：
控制流速，一般1drop/s以下,，可參見廠家的一些參數(shù),；必要時更改極性（很多時一個極性就可以將樣品洗脫完畢）。
（6）再生以備下次使用,。