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大鼠褪黑素（MT）ELISA實驗說明
閱讀：40 發(fā)布時間：2025-6-6檢測范圍
1.5ng/L-48ng/L
使用目的
本試劑盒用于測定大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中褪黑素（MT）含量,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠褪黑素（MT）水平,。用純化的大鼠褪黑素（MT）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入褪黑素（MT）,，再與HRP標記的褪黑素（MT）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的褪黑素（MT）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠褪黑素（MT）濃度,。
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
48ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
24ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
12ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
6ng/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
3ng/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
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