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兔免疫球蛋白G2(IgG2)ELISA實驗說明
閱讀：352 發(fā)布時間：2025-1-9檢測范圍
5μg/ml - 260μg/ml
使用目的
本試劑盒用于測定兔血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白G2(IgG2)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中兔免疫球蛋白G2(IgG2)水平。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白G2(IgG2),，再與HRP標記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白G2(IgG2)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中兔免疫球蛋白G2(IgG2)濃度。
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
256μg/ml | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
128μg/ml | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
64μg/ml | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
32μg/ml | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
16μg/ml | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
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