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檢測范圍                                                         

0.2ng/ml - 10ng/ml

 

使用目的

本試劑盒用于測定小鼠血清,，血漿及相關液體樣本中脂褐質(zhì)（Lipofuscin）含量,。

 

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠脂褐質(zhì)（Lipofuscin）水平。用純化的小鼠脂褐質(zhì)（Lipofuscin）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入脂褐質(zhì)（Lipofuscin），再與HRP標記的脂褐質(zhì)（Lipofuscin）抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的脂褐質(zhì)（Lipofuscin）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中小鼠脂褐質(zhì)（Lipofuscin）濃度,。

 

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

 

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

 

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

 

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