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小鼠促黃體激素檢測(cè)說明
閱讀：1485 發(fā)布時(shí)間：2012-5-18
小鼠促黃體激素 （LH）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測(cè)范圍： 96T
70pg/ml-2400pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中促黃體激素 （LH）含量。實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠促黃體激素 （LH）水平。用純化的小鼠促黃體激素（LH）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入促黃體激素 （LH）,，再與 HRP標(biāo)記的促黃體激素 （LH）抗體結(jié)合,，形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色,。 TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促黃體激素 （LH）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（ OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠促黃體激素 （LH）濃度。試劑盒組成
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標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于 -20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性,。操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測(cè)樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘,。
4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去,，如此重復(fù) 5次,，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外,。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻,， 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零,， 450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（ OD值）,。測(cè)定應(yīng)在加終止
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液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),， OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請(qǐng)避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn) .
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn),。保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期： 6個(gè)月