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小鼠β-半乳糖苷酶（β-gal） ELISA 實驗說明
閱讀：829 發(fā)布時間：2024-11-21檢測范圍：
3 IU/L -150 IU/L
使用目的
本試劑盒用于測定小鼠血清,，血漿及相關液體樣本中β-半乳糖苷酶（β-gal）活性,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠β-半乳糖苷酶（β-gal）水平,。用純化的小鼠β-半乳糖苷酶（β-gal）體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入β-半乳糖苷酶（β-gal）,，再與HRP標記的β-半乳糖苷酶（β-gal）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過徹-底洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的β-半乳糖苷酶（β-gal）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠β-半乳糖苷酶（β-gal）活性濃度,。
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
120IU/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
60IU/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
30IU/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
15IU/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
7.5IU/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
11. 測定：以空白孔調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
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