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恒遠生物|牛血清淀粉樣蛋白A (SAA)ELISA實驗說明
閱讀:761 發(fā)布時間:2024-1-30檢測范圍:
25μg/L -900μg/L
使用目的:
本試劑盒用于測定牛血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中血清淀粉樣蛋白A (SAA)含量,。
實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中牛血清淀粉樣蛋白A (SAA)水平。用純化的牛血清淀粉樣蛋白A (SAA)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入血清淀粉樣蛋白A (SAA),再與HRP標記的血清淀粉樣蛋白A (SAA)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的血清淀粉樣蛋白A (SAA)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中牛血清淀粉樣蛋白A (SAA)濃度,。
標本要求 :
1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟:
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
800μg/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
400μg/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
200μg/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
100μg/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
50μg/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。
7.溫育:操作同3,。
8.洗滌:操作同5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白孔調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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