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恒遠(yuǎn)生物為您講解如何對污染的菌種進(jìn)行純化
閱讀:1520 發(fā)布時間:2024-1-26菌種在分離,、保藏和生產(chǎn)過程中,,極易遭致雜菌污染,,因此必須對染有雜菌的菌種進(jìn)行提純,,方能用于生產(chǎn)。根據(jù)污染的類型和程度,,需采用不同的純化措施,。
1. 排除細(xì)菌或酵母菌污染
在菌種培養(yǎng)中,用肉眼仔細(xì)觀察培養(yǎng)基表面,,不難發(fā)現(xiàn)被細(xì)菌或酵母菌污染的分離物常出現(xiàn)黏稠狀的菌落,。取被純化物接種在無冷凝水、硬度較高(瓊脂用量2.3%~2.5%)的斜面上,,再降低培養(yǎng)溫度至15~20℃,,利用某些大型真菌在較低的溫度下,菌絲生長速度比細(xì)菌蔓延速度快的特點,,用尖細(xì)的接種針切割菌絲的前端,,轉(zhuǎn)接到新的試管斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng),連續(xù)2~3次就能獲得所要的純菌絲,。也可打破試管,,挑取內(nèi)部長有基內(nèi)菌絲的瓊脂塊,移入無冷凝水的培養(yǎng)基上,,該法適于被好氣性細(xì)菌污染的母種,。
2. 排除霉菌污染
霉菌和細(xì)菌不同,它和食用菌菌絲很相似,也有氣生菌絲和基內(nèi)菌絲,。分離的方法主要是抑制雜菌生長,,拉大食用菌菌絲生長和雜菌菌絲生長的范圍差,從食用菌菌落前端切割,,移植入新培養(yǎng)基,。雜菌發(fā)現(xiàn)越早,分離的成功率越大,。嚴(yán)格地說,,在斜面培養(yǎng)基上的非接種部位發(fā)現(xiàn)的白色菌絲,應(yīng)認(rèn)為是雜菌菌落,,應(yīng)馬上提純,。若有色孢子已出現(xiàn),,一方面易使分生孢子飄散,,另一方面其基內(nèi)菌絲早已蔓延,可能和食用菌菌絲混生一起,。如霉菌剛出現(xiàn)孢子且尚未成熟,、變色,則可采用前端菌絲切割法提純,。轉(zhuǎn)管時先將菌絲接種在斜面jian端,,當(dāng)長滿斜面后,及時將原接種點連同培養(yǎng)基一起挖掉,;如霉菌菌落顏色已深,,說明孢子已成熟,稍一振動孢子就會飄滿培養(yǎng)基,,若再行上法意義不大,。如菌絲蔓延范圍較大,可將0.2%升gong溶液或1%多菌靈處理過的濕濾紙塊覆蓋在霉菌的菌落上,,可抑制霉菌生長,,防止孢子擴散,后用滅菌接種鏟將表層鏟掉,,隨之用接種針鉤取基內(nèi)菌絲移入新的培養(yǎng)基,,如此2~3次。
3. 限制培養(yǎng)
取直徑7~10毫米,、高4~6毫米的玻璃環(huán)或不銹鋼環(huán),,經(jīng)酒精燈火焰灼燒后趁熱放到斜面培養(yǎng)基中央,將環(huán)的一半嵌入培養(yǎng)基內(nèi),,然后將染有細(xì)菌的接種塊放入環(huán)內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),。細(xì)菌生長會被限制在環(huán)內(nèi),而食用菌菌絲則可越過環(huán)而長到環(huán)外的培養(yǎng)基上,轉(zhuǎn)管后即可得到純化,。
4. 覆蓋培養(yǎng)
在污染了細(xì)菌的食用菌菌絲斜面上傾注一層厚約2毫米的培養(yǎng)基,,培養(yǎng)一段時間,當(dāng)食用菌菌絲透過培養(yǎng)基形成新的菌落時,,即可切割轉(zhuǎn)管,。最好進(jìn)行二次覆蓋。
5. 基質(zhì)菌絲純化培養(yǎng)
對棉塞長有霉菌的試管斜面,,可將試管打碎,,取出培養(yǎng)基,用0.1%升gong浸泡2分鐘,,用無菌水淋洗,,再用無菌濾紙吸干。取一段2厘米的培養(yǎng)基從中部切開,,在斷面上用無菌刀片切成米粒大小的塊,,移入新的斜面上進(jìn)行培養(yǎng)。
6. 藥物處理
菌種提純時,,可向培養(yǎng)基中注入選擇性強的抗菌制劑,,如加入 5~10毫克/升的多菌靈(MBC)、涕必靈(TBZ)或托布津等,,可有效地防止菌霉混生,;在每毫升培養(yǎng)基中加入30~40毫克鏈霉素、20~30毫克四環(huán)素,、金霉素,,或50毫克高錳酸鉀,可以有效地防止細(xì)菌混生,;加入灰黃霉素(20單位/毫升),,可抑制真菌生長。
7. 破碎菌絲
從試管中取出已污染的培養(yǎng)基,,放在0.1%升gong水中處理2分鐘,,用無菌水沖洗,無菌紙吸干,,再放入有玻璃珠的無菌水內(nèi),,經(jīng)組織破碎,稀釋后注入平板培養(yǎng),,取其單個菌落純化培養(yǎng),。